胰蛋白酶(豬胰)/Trypsin(porcine pancreas),9002-07-7

 
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最后更新: 2021-06-03 08:59
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 英文名稱:Trypsin(porcine pancreas)CAS號(hào):9002-07-7 分子量:23300效價(jià):1:250活力:≥250U/mg干燥失重:≤5.0%性狀:由豬胰提取而得的一種肽鏈內(nèi)切酶,淡黃色粉末。不溶于乙醇、甘油、氯仿和乙醚。等電點(diǎn)pI 10.5。Ca2+對(duì)酶活性有穩(wěn)定作用;重金屬離子、磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶抑制劑對(duì)其活性有強(qiáng)烈抑制溶解方法1:用90ML無Ca、Mg離子PBS溶解胰蛋白酶,再加該P(yáng)BS至100ML(該酶溶解較難,必要時(shí)在4度過夜以便溶解)。用時(shí)調(diào)PH7.2左右,用5.6%NaCO3調(diào)溶解方法2:維持反應(yīng)鍋內(nèi)溶液80℃的溫度至少半小時(shí),然后由夾層通入自來水降低鍋內(nèi)溶液溫度至 50 ℃,按 1∶30的酶/底物比加入需要量的胰蛋白酶,在攪拌器連續(xù)攪拌下開始酶解反應(yīng),期間調(diào)整通入反應(yīng)鍋夾層的蒸汽量使溫度維持在50℃。酶解反應(yīng)過程中,為保證胰蛋白酶的生物活性使反應(yīng)液的pH維持在8.0,這就需要不斷在反應(yīng)液中加入NaOH稀溶液。自加入胰蛋白酶起6h后酶解反應(yīng)結(jié)束溶解方法3:準(zhǔn)確稱取NaCl 8.00g,KCl 0.40g、Na2HPO4•7H2O 0.09g、KH2PO4 0.06g、酚紅0.01g、NaHCO3 0.35g,溶解于約800mL五蒸水中,充分溶解后定容至1000mL,分裝,滅菌備用,制成D-hanks液。準(zhǔn)確稱取胰蛋白酶0.125g,溶解于100mL D-hanks液中 ,于4℃過夜,過濾分裝,-20℃保存?zhèn)溆糜猛荆嚎蒲小?shí)驗(yàn)。專一性催化水解賴氨酸、精氨酸羧基形成的肽鍵,可用于蛋白質(zhì)化學(xué)研究保存:2~8℃

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