細(xì)胞熒光染色Hoechst 33342染色液

此染色液做成濃縮液和稀釋液主要是為了使用方便，因?yàn)闈饪s液才1ml,解凍起來(lái)很快，實(shí)際也可以一次將濃縮液都加入稀釋液中，混勻使用。但如果一次使用量比較少，使用次數(shù)比較多，是適當(dāng)分裝一下，免得多次凍融。

使用說(shuō)明：
Hoechst 33342染色液染色液的配制：將Hoechst 33342濃縮液取出解凍，輕輕混勻，短時(shí)間離心，根據(jù)使用量，按照1ml33342稀釋液加入20ul33342濃縮液的比例配制，即成Hoechst 33342染色液。此配好的染色液深度為10ug/ml,如果感覺(jué)染色顏色比較深，可適當(dāng)?shù)南♂專ㄓ孟♂屢海４伺浜玫娜旧何从猛昕纱娣庞?20℃避光。
1. 對(duì)于固定的細(xì)胞或組織：
   a. 對(duì)于細(xì)胞或組織樣品，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑。隨后如果需要進(jìn)行免疫熒光染色，則先進(jìn)行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續(xù)步驟進(jìn)行Hoechst 33342染色。如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行后續(xù)的Hoechst 33342染色。
   b. 對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片，加入少量Hoechst 33342染色液，覆蓋住樣品即可。對(duì)于懸浮細(xì)胞，至少加入待染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5分鐘。
   c. 吸除Hoechst 33342染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。
   d. 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)看到凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染。
2. 對(duì)于活細(xì)胞或組織：
   a. 加入適當(dāng)量Hoechst 33342染色液，必須充分覆蓋住待染色的樣品，通常對(duì)于六孔板一個(gè)孔需加入1ml染色液，對(duì)于96孔板一個(gè)孔需加入100微升染色液。
   b. 在適宜于細(xì)胞培養(yǎng)的溫度培養(yǎng)20-30分鐘。棄染色液，用PBS或培養(yǎng)液洗滌2-3次即可進(jìn)行熒光檢測(cè)。