糧食農(nóng)藥速測卡

1、原理

丁酰膽堿酯酶對磷農(nóng)藥高度敏感，根據(jù)酶活性的抑制情況就可以檢測到微量的農(nóng)藥殘留。丁酰膽堿酯酶可催化靛酚乙酸酯（紅色）水解為乙酸與靛酚（藍(lán)色），磷類農(nóng)藥對丁酰膽堿酯酶有抑制作用，使催化、水解、變色的過程發(fā)生改變，由此可判斷出樣品中是否有過量磷類農(nóng)藥的存在。

含硫類磷殺蟲劑是糧食生產(chǎn)中比較常用的農(nóng)藥，多數(shù)毒性較高。采用溴制劑（農(nóng)殘速測增強(qiáng)劑）對糧食樣品提取液進(jìn)行氧化前處理，可以顯著降低這類農(nóng)藥的檢出限，提高丁酰膽堿酯酶對這類農(nóng)藥的檢測靈敏度。

2、試劑

2.1糧食農(nóng)藥速測卡：固化有丁酰膽堿酯酶和靛酚乙酸酯顯色劑的酶試紙（簡稱速測卡）。

2.2pH 7.8磷酸緩沖液：隨產(chǎn)品附送,每包用1000 mL純化水溶解。

2.3農(nóng)殘速測增強(qiáng)劑（溴制劑）：隨產(chǎn)品附送。

3、儀器

3.1農(nóng)藥殘留速測儀。

3.2樣品粉碎機(jī)。

3.3礱谷機(jī)。

3.4電子天平（0.1 g）。

3.5超聲波清洗儀。

3.6低速離心機(jī)。

3.7可調(diào)移液器（10～100 μL，1～5 mL）。

4、分析步驟

4.1樣品處理

4.1.1把糧食樣品粉碎至95%以上通過20目篩（稻谷應(yīng)先脫殼），稱取10 g樣品，倒入提取瓶，加入30 mL pH 7.8的磷酸緩沖液混勻。

4.1.2用超聲波清洗儀超聲5 min，待溶液分層后取上層提取液2 mL于試管內(nèi)，4000 r/min離心1 min；取1 mL上清液，加入50 μL農(nóng)殘速測增強(qiáng)劑，備用。

4.2檢測過程 

4.2.1將農(nóng)藥殘留速測儀接通電源，開機(jī)預(yù)熱，溫度達(dá)到40℃后，設(shè)定預(yù)反應(yīng)時(shí)間為10min，顯色時(shí)間為3min。

4.2.2取出糧食農(nóng)藥速測卡，先對折一下形成折痕，然后插入農(nóng)藥殘留速測儀的卡槽中（白片在下，紅片在上）。先取80 μL pH 7.8磷酸緩沖液加到空白對照卡的白色藥片上，然后依次取80 μL糧食樣品提取液分別加到其余的白色藥片上，按下開始鍵，預(yù)反應(yīng)10 min。

4.2.3聽到鳴音提示后將農(nóng)藥殘留速測儀上蓋合下來，使白色藥片和紅色藥片充分接觸，發(fā)生顯色反應(yīng)3min。

4.2.4再次聽到鳴音提示后將農(nóng)藥殘留速測儀上蓋打開，觀察顯色反應(yīng)的結(jié)果，以空白對照卡所顯藍(lán)色作為標(biāo)準(zhǔn)，判斷糧食樣品的檢驗(yàn)結(jié)果。

4.2.5如果沒有條件配置農(nóng)藥殘留速測儀，也可以直接用手代替儀器進(jìn)行檢測，放置10 min預(yù)反應(yīng)后，用手對折捏3 min，打開觀察結(jié)果。用手操作，容易受環(huán)境溫度和各人手溫影響。

5、結(jié)果判定

結(jié)果以丁酰膽堿酯酶被磷類農(nóng)藥抑制（為陽性）、未抑制（為陰性）表示。

與空白對照卡比較，糧食樣品速測卡的白色藥片不變色或略有淺藍(lán)色均為陽性結(jié)果。

對測定結(jié)果為陽性的樣品，應(yīng)重復(fù)檢驗(yàn)2～3次，進(jìn)一步通過其他分析方法確定具體農(nóng)藥種類和含量。

如果空白對照卡沒有顯示藍(lán)色，說明檢測不正常，可能是速測卡失效或者環(huán)境中有相關(guān)農(nóng)藥和干擾物質(zhì)存在，或者是加樣的量不夠，需要排除有關(guān)問題后再進(jìn)行檢測。

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