羥基自由基清除能力測(cè)試試劑盒A004-96T上海現(xiàn)貨

 
品牌: 國(guó)產(chǎn)
產(chǎn)品型號(hào): A004-96T
產(chǎn)品規(guī)格: 96T
單價(jià): 面議
起訂: 1 盒
供貨總量: 1000 盒
發(fā)貨期限: 自買家付款之日起 3 天內(nèi)發(fā)貨
所在地: 上海
有效期至: 長(zhǎng)期有效
最后更新: 2024-09-23 11:00
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公司基本資料信息
詳細(xì)說明

羥基自由基清除能力測(cè)試試劑盒A004-96T

聯(lián)系電話:17715331663  QQ:2303607288

1. 本產(chǎn)品采用Fenton法產(chǎn)生羥基自由基,以脫氧核糖為攻擊靶,以TBA為顯色劑,是目前經(jīng)典、應(yīng)用為廣泛,也廣受認(rèn)可的羥基自由基測(cè)定方法。參考文獻(xiàn)眾多,便于寫作和數(shù)據(jù)比較分析;

2. 本產(chǎn)品同時(shí)適用于分光光度計(jì)檢測(cè)和酶標(biāo)儀檢測(cè)。

 

一、測(cè)定原理

金屬離子與過氧化氫通過芬頓反應(yīng)生成的羥基自由基(•OH),•OH攻擊脫氧核糖并破壞其環(huán)呋喃環(huán)生成丙二醛(MDA)。丙二醛與2-硫代巴比妥酸(TBA)結(jié)合后在532nm處具有吸收峰(Halliwell等,1987,ANAL BIOCHEM)。具體反應(yīng)如下:

Fe3+-EDTA+ 抗壞血酸→ Fe2+-EDTA +氧化的抗壞血酸(1)

Fe2+-EDTA + H2O2 → OH- + •OH +Fe3+-EDTA (2)

•OH + 脫氧核糖→ 脫氧核糖碎片 MDA (3)

MDA + 2TBA → 發(fā)色體(4)

專一的羥基自由基劑能減少羥基對(duì)脫氧核糖的攻擊,從而減少M(fèi)DA產(chǎn)生而使發(fā)色體減少。通過測(cè)定反應(yīng)終產(chǎn)物的吸光值即可判斷受測(cè)樣品的羥基自由基清除能力。

二、試劑組成

試劑一:液體,2mL;

試劑二:液體,2mL;

試劑三:液體,2mL;

試劑四:液體,2mL;

試劑五A:液體,100mL;

試劑五B:淡黃色粉末;

試劑六:液體,100mL;

標(biāo)準(zhǔn)品:體系終濃度為10mM的甘露醇(雙蒸水配制),10mL。

三、儲(chǔ)存條件及有效期

試劑盒-20℃可保存1個(gè)月。

四、試劑的配制

試劑一應(yīng)用液:待試劑融化后,在試劑一瓶中加入18mL雙蒸水,搖勻待用;

試劑二應(yīng)用液:待試劑融化后,在試劑二瓶中加入18mL雙蒸水,搖勻待用;

試劑三應(yīng)用液:待試劑融化后,在試劑三瓶中加入18mL雙蒸水,搖勻待用;

試劑四應(yīng)用液:待試劑融化后,在試劑四瓶中加入18mL雙蒸水,搖勻待用;

試劑五應(yīng)用液:待試劑五A融化后,將試劑五B全部倒入試劑五A中,充分搖勻溶解(若發(fā)現(xiàn)不好溶解,可超聲波助溶或適當(dāng)加熱。如不易觀察是否全部溶解,可將試劑五A倒入燒杯中,配制好后再倒回試劑五A瓶?jī)?nèi),避光保存);

試劑六:直接使用;

標(biāo)準(zhǔn)液:根據(jù)實(shí)際需要,采用雙蒸水稀釋使用。

所有試劑均需現(xiàn)配現(xiàn)用!

五、操作步驟

 

樣品對(duì)照孔1

樣品測(cè)定孔

空白孔

樣品溶液(μL)

200

200

 

雙蒸水(μL)

200

 

200

試劑一應(yīng)用液(μL)

 

200

200

試劑二應(yīng)用液(μL)

200

200

200

試劑三應(yīng)用液(μL)

200

200

200

試劑四應(yīng)用液(μL)

200

200

200

充分混勻,37℃水浴30min使之充分反應(yīng)。

 

樣品對(duì)照孔

樣品測(cè)定孔

空白孔

試劑六(μL)

1000

1000

1000

試劑五應(yīng)用液(μL)

1000

1000

1000

充分混勻,100℃沸水浴15min2

冷卻后進(jìn)行比色讀數(shù)。如您具有可以測(cè)定532nm處吸光值的酶標(biāo)儀,可從反應(yīng)液中取出200μL于酶標(biāo)板內(nèi)采用酶標(biāo)儀讀數(shù);或者您也可以采用分光光度計(jì)測(cè)定532nm處吸光值。

1如樣品顏色較淺可不做樣品空白(即認(rèn)為值為0);

2建議反應(yīng)15min,也可適當(dāng)延長(zhǎng)或縮短時(shí)間至10-20min,但同一批樣品加熱時(shí)間需保持一致。

六、注意事項(xiàng)

1. 如樣品中色素物質(zhì)不是分析對(duì)象,建議先進(jìn)行脫色處理,處理后樣品可不做對(duì)照孔;

2. 如不確定樣品的羥基自由基清除能力,可先做不同濃度的稀釋液進(jìn)行摸索,并選擇適宜濃度進(jìn)行測(cè)定,高濃度下,濃度與清除率間并不線性相關(guān)。注意,產(chǎn)物的不同自由基清除能力可能相差很大,可能一個(gè)化合物的超氧陰離子自由基清除能力特別好,IC50可以低于10μg/mL,但羥基自由基清除能力很差,IC50達(dá)到10mg/mL,或者根本沒有清除能力;

3. 混勻很重要,建議每加一種試劑時(shí)均充分混勻。

4. 100℃沸水浴可采用水浴鍋或者電磁爐進(jìn)行加熱。加熱時(shí)可用錫紙蓋住試管管口,并用牙簽戳一個(gè)小孔。若使用一次性離心管進(jìn)行實(shí)驗(yàn),切記不可將上蓋蓋死,氣體膨脹有爆裂危險(xiǎn)!

5. 加樣順序不可顛倒!不可將試劑一至四混勻后加入樣品;

6. 本測(cè)試盒部分試劑對(duì)皮膚有一定傷害,請(qǐng)戴手套操作。在沸水浴時(shí)小心蒸汽燙傷;

7. 煮沸加熱時(shí)間和溫度對(duì)本測(cè)試至關(guān)重要,請(qǐng)務(wù)必保證所有測(cè)試管加熱時(shí)間和溫度均相同。同時(shí)請(qǐng)務(wù)必等待樣品冷卻到室溫時(shí)再進(jìn)行讀數(shù)測(cè)定,如需快速冷卻,可采用自來水沖洗試管外壁的方法;

8. 測(cè)定羥基自由基的方法總類繁多(Halliwell等,1988,Methods of Biochemical Analysis),同一樣品采用不同方法測(cè)定時(shí)會(huì)有一定差異,因此不同方法測(cè)定的結(jié)果不能簡(jiǎn)單比較;

9. 本測(cè)試樣品一般不可采用溶劑溶解!極少量也不可以!常見的溶劑如乙醇等,其通過本方法得到的羥基自由基清除率極高,超過許多常見劑,不可以忽略。不可使用的溶劑及機(jī)理參見文獻(xiàn):Xican Li, 2013, Food Chemistry.

品名 價(jià)格(元) Stock
A004-96T 820 YES
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