portant; word-wrap: break-word !important; color: rgb(157, 87, 202);">一、稱樣：
（1）一般稱量25g，由于稱樣量較大，標準中對于稱樣的準確性未作出明確規定，微生物室常用稱樣的電子天平最大允許誤差為±0.1g，一般遵循“宜多不宜少”的原則，即實際稱樣時可根據樣品情況稱取超出25g（如硬質糖果等，檢驗人員應依據樣品實際情況決定如何稱樣）；
（2）對于部分食品添加劑已明確須稱取1.0g的，則須嚴格精確稱量。
portant; word-wrap: break-word !important; color: rgb(157, 87, 202);">二、樣品稀釋：
（1）固體或半固體：稱取25g樣品于均質袋中，加入已滅菌的生理鹽水225g，稍捏碎（特別是糕點/面包及其他淀粉制品），放入拍擊式均質器均質1min，此時即制備成1：10的樣品勻液。以移液器或滅菌吸取該液體至9mL滅菌生理鹽水試管中，換上新的滅菌移液器槍頭，緩緩吸取液體后反復吹打2次，此時即制備成1：100的勻液，以此類推，制備10倍系列稀釋勻液。
（2）液體樣品：直接吸取原液進行檢驗，稀釋時可直接吸取1mL原液到9mL滅菌生理鹽水試管中按照“固體或半固體”的方式稀釋。
portant; word-wrap: break-word !important; color: rgb(157, 87, 202);">三、稀釋度的選取：
液體樣品可直接取原液進行檢驗；固體或半固體則必須依據檢驗經驗，選取2-3個適宜稀釋度進行檢驗（一般樣品選取1：10，1：100，1：1000三個稀釋度進行檢驗。若遇到不常做的樣品，可適當延長稀釋度至1：100000甚至1：1000000）。
portant; word-wrap: break-word !important; color: rgb(157, 87, 202);">四、質量控制：
空白對照：分別吸取1mL滅菌生理鹽水到平皿中做空白對照。（若空白有菌落生長則該實驗無效）。
portant; word-wrap: break-word !important; color: rgb(157, 87, 202);">五、平板計數瓊脂（PCA）：
滅菌條件為121℃、15min。一般情況下于500mL敞口錐形瓶（三角瓶）中配制400mL/瓶。
portant; word-wrap: break-word !important; color: rgb(157, 87, 202);">六、有時樣品基質比較特殊，樣品勻液有細小的顆粒與菌落不易區分，此時可采用如下方法進行區分：
（1）配制1%的2,3,5-三苯基氯化四氮唑溶液（又稱紅四唑或紅四氮唑，簡稱TTC），高壓滅菌后避光冷藏備用。紅四唑滅菌條件為：121℃、20min；
（2）待PCA瓊脂培養基冷卻至適宜傾注溫度時，無菌加入上述TTC溶液2mL，充分搖勻（此時PCA中TTC濃度為0.005%）。
portant; word-wrap: break-word !important; color: rgb(241, 136, 35);">加入TTC的目的及注意事項：培養后，菌落被TTC染成紅色，而樣品顆粒不變色，方便計數；PCA中TTC的濃度不宜過高，否則會抑制微生物的生長，對實驗結果產生影響。（特殊情況下方添加TTC，常規實驗無須添加，特別是對于菌落數量較少的樣品不宜添加。方法來源依據為《化妝品衛生規范》中菌落總數測定相關章節）
portant; word-wrap: break-word !important; color: rgb(157, 87, 202);">七、稀釋液：
常采用0.85%氯化鈉溶液（生理鹽水），121℃、15min高壓滅菌后冷卻備用。
portant; word-wrap: break-word !important; color: rgb(157, 87, 202);">八、傾注培養基時，根據對樣品污染情況的估計（同一類型樣品的微生物檢測經驗），若樣品有表面蔓延生長的可能性，則待第一次傾注的瓊脂凝固后，可在表面再覆蓋一層瓊脂以避免菌落蔓延而難以計數。
portant; word-wrap: break-word !important; color: rgb(157, 87, 202);">九、水產品30±1℃培養72±3h；其它樣品36±1℃培養48±2h。注意：此處的“水產品”是指生魚片、魷魚干等未經深度加工的水產品。
portant; word-wrap: break-word !important; color: rgb(157, 87, 202);">十、本標準的重難點為菌落計數及計算。
除標準中已說明的要求外，有以下幾點需要注意：
（1）菌落計數時，從低稀釋度的平板開始計數。若所有平板上的菌落數均小于30CFU，則須計數所有平板上的菌落數，但僅采用最接近30CFU的兩個平板的菌落數來計算最終菌落總數。
以固體樣品舉例，菌落數選取、計算過程及結果修約如下：
（2）當第一稀釋梯度一個板上菌落數高于30，另一個低于30，則依據標準應當以介于30-300之間的菌落數作為該稀釋梯度的菌落數。（存在爭議，實際遇到該類情況時應謹慎對待）
以固體樣品舉例，菌落數選取、計算過程及結果修約如下：
（3）若所有平板上的菌落數均大于30CFU，則只計數30-300CFU之間的平板上的菌落數，并采用這些數據，依據標準中給定的公式，進行最終菌落總數的計算，此時將大于300CFU的記為“多不可計”，以“TNTC”表示。
以固體樣品舉例，根據標準中給定的公示，菌落數選取、計算過程及結果修約如下：
（4）若所有稀釋度的平板菌落數都大于300，則不能所有都計為TNTC，必須將最高稀釋度的兩個平板上的菌落逐一地計數，再計算平均數，該平均數為該梯度的菌落總數，其余平板上的菌落數可記為TNTC。
以固體樣品舉例，菌落數選取、計算過程及結果修約如下：
（5）計算菌落總數時，須嚴格按照標準要求進行計算。
特殊情況：
①若所有平板均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數。“最低稀釋倍數”并不是固定不變的，與檢驗人員選取的稀釋度有關。如：某樣品多次檢驗后發現菌落總數較高，檢驗人員在梯度稀釋后取1:1000、1:10000、1:100000三個梯度的稀釋液傾注平板，最終所有平板上的均無菌落生長，則計算過程為＜1×1000，最終結果為＜1000CFU；若選取1:10、1:100、1:1000三個梯度的稀釋液傾注平板，均無菌落生長，則最終結果為＜10CFU。因此，稀釋度的選擇對于結果存在較大影響，選擇時應謹慎。
②最低稀釋度兩個平板只有一個平板上長了1個菌落，若為固體樣品且本次檢驗的最低稀釋倍數為1:10，此時計算過程為（1+0）/2×10=5，由于默認固體樣品最小檢出量為10CFU，故本次檢驗的菌落總數結果為10CFU。注意：對于該情況一直存在爭議，不同的檢驗人員可能做法不一，有人保留為5CFU，有人保留為10CFU，并無固定做法。（建議檢驗人員保持一貫做法，不要隨意更改）
舉例如下：
portant; word-wrap: break-word !important; color: rgb(157, 87, 202);">十一、對于水產品、冷凍食品、速凍食品等菌落總數含量較高、限量值較大的食品類別，建議多增加稀釋梯度（可稀釋至10-4甚至10-5），避免稀釋度較低、濃度較大導致培養后平板上菌落蔓延、彌散而難以計數甚至無法計數。
portant; word-wrap: break-word !important; color: rgb(54, 65, 173);">portant; word-wrap: break-word !important;">GB 4789.10-2016 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 金黃色葡萄球菌檢驗
portant; word-wrap: break-word !important; color: rgb(54, 65, 173);">portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 18px;">
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">第一法 金黃色葡萄球菌定性檢驗
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px; color: rgb(241, 136, 35);">1、7.5%氯化鈉肉湯增菌培養：
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">（1）若樣品本身在均質后清澈，培養18h觀察呈現一定程度的渾濁（與培養前相比），則接種平板；若18h后仍無變化，繼續培養至24h后無論渾濁與否都接種至平板；
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">（2）若樣品本身在均質后渾濁，則直接培養至24h后再接種平板。
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px; color: rgb(241, 136, 35);">2、血平板：portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">36±1℃培養18h后觀察，若有菌落生長或有菌落生長的跡象（無論是否溶血），則應酌情配制NA、BHI并分裝至小試管中（NA 10mL/管、BHI 5mL/管）、滅菌后NA應斜放凝固成瓊脂斜面備用。至血平板培養至24h取出，挑取菌落進行革蘭氏染色鏡檢，同時挑取菌落接種至NA斜面、BHI肉湯管，36±1℃培養24h。
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px; color: rgb(241, 136, 35);">3、接種原則：
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">（1）革蘭氏染色后還剩余10個或10個以上菌落，則NA、BHI分別接種5管；
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">（2）若多于5個（不包括5個）不足10個，則BHI接種5管，剩余的接種NA；
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">（3）5個及以下則全部接種BHI，不接種NA。
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px; color: rgb(241, 136, 35);">4、BP平板：portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">36±1℃培養24h后觀察，有菌落生長則取出，無菌落生長則繼續培養至48h后再觀察。若血平板已挑取菌落進行證實試驗，則不必再挑取BP平板上的菌落進行實驗。 若血平板上無菌落生長，則應在24h～48h內逐步觀察BP平板是否長菌或有無長菌跡象，有則需配置BHI及NA，挑取BP上的菌落進行純化、增菌，36±1℃培養24h。
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px; color: rgb(241, 136, 35);">5、血漿凝固酶試驗：
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">（1）根據BHI管數，取凍干血漿粉，每瓶用移液槍加入0.5mL生理鹽水，使其充分溶解，再換移液槍槍頭取0.3mLBHI培養物加入其中（每管BHI用1個槍頭），振蕩搖勻后于36±1℃培養，計時，每30min觀察一次，如呈現凝固（將試管傾斜或倒置時出現凝塊）或半凝固（一般的液體呈現凝固）則判定為陽性。若一直不凝固，則一直觀察，直至觀察至6h（查看12次）還未凝固，則試驗終止，判定為陰性結果；若中途出現完全凝固或半凝固，則試驗終止，判定為陽性結果。
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">（2）同時取金黃色葡萄球菌標準菌株（ATCC 6538以及CMCC（B）26003各一支）制成菌懸液后作為陽性對照、以滅菌生理鹽水為陰性對照，分別接種至BHI中同步培養后進行血漿凝固酶試驗。
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">（3）若血漿凝固酶試驗結果可疑，則挑取NA上的菌落接種BHI再次進行試驗。
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">第二法 金黃色葡萄球菌平板計數法
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">1、取1mL樣品稀釋勻液接種3個BP平板（此處并未嚴格按照標準中0.3mL、0.3mL、0.4mL精確取樣，由于如此操作會增加試驗時間，無法在15min內完成試驗）。
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">2、涂布時不要觸及平板邊緣（會導致樣液涂抹不均勻，大部分匯集于邊緣）。
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">3、可用同一根涂布棒從低稀釋度到高稀釋度進行涂布（不用換涂布棒）。
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">4、涂布完成后應稍微放置一段時間使培養基吸收樣品勻液。
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">5、若水珠較多，可正置于培養箱中1～2h后再倒置培養。
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">6、36±1℃培養24h后觀察，有典型菌落生長則進行證實試驗（革蘭氏染色鏡檢、血漿凝固酶試驗、劃線血平板）。若無菌落生長則繼續培養至48h后再觀察，有典型菌落生長則進行證實試驗，無典型菌落生長則試驗終止。
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">第三法 金黃色葡萄球菌MPN計數法
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">1、樣品稀釋同菌落總數，取3個連續稀釋度稀釋液（或包括液體樣品原液），每個稀釋度接種3管7.5%氯化鈉肉湯，每管接種1mL，36±1℃培養18h后觀察，若出現渾濁則接種至BP平板，若無變化則繼續培養至24h后再接種至BP平板。
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">2、劃線接種至BP平板，36±1℃培養24h后觀察，有典型菌落生長則進行證實試驗（革蘭氏染色鏡檢、血漿凝固酶試驗、劃線血平板）。若無菌落生長則繼續培養至48h后再觀察，有典型菌落生長則進行證實試驗，無典型菌落生長則試驗終止。
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">
portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 16px;">3、根據證實后的陽性管數差MPN表得出結果。
portant; word-wrap: break-word !important; color: rgb(54, 65, 173);">portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 18px;">
portant; word-wrap: break-word !important; color: rgb(54, 65, 173);">portant; word-wrap: break-word !important; font-size: 18px;">
portant; word-wrap: break-word !important; color: rgb(54, 65, 173); font-size: 18px;">portant; word-wrap: break-word !important;">GB 4789.15-2016 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 霉菌和酵母計數
portant; word-wrap: break-word !important; font-family: 宋體; font-size: 19px;">
第一法 霉菌和酵母平板計數法
1、孟加拉紅培養基滅菌條件比較特殊：121℃，20min。
2、稀釋液可選擇生理鹽水、磷酸鹽緩沖液，還可選擇無菌水。
3、正置平板培養。為避免孢子擴散、菌落蔓延，可選擇使用一次性塑料培養皿。
4、“觀察并記錄培養至第5d的結果”，意味著需要從培養的第二天開始逐日觀察并記錄霉菌和（或）酵母的生長情況，且原始記錄須體現“逐日觀察”。
5、特別注意：“菌落數在10以內時，采用一位有效數字報告，菌落數在10～100之間時，采用兩位有效數字報告”，即：在直接吸取原液檢驗時，若兩個平板上的平均菌落數小于10，則四舍五入后的數值直接記為最終結果（不可四舍五入為10），若1：10的兩個平板上一個長1個菌落，另一個無菌落生長，則平均數為0.5，最終計算結果為5，結果報告為5，而不是10。
為防止孢子蔓延污染霉菌培養箱，可每周用75%酒精擦拭消毒兩次或每次檢出霉菌時用殺孢子劑消毒。
