【微生物檢測】淺談微生物盲樣心得！

作者：張珍

畢業一年，從事微生物檢測也有一年之余，記得剛畢業來到公司的時候，領導問我想要干哪個，我說都行，因為在學校學的都是書本知識，動手操作能力較差，所以，當時覺得干那個都得從頭學。就這樣，我被安排到了微生物組，從此與微生物就有了不解之緣。

八月底我們接到一個沙門氏菌盲樣，需要我們檢驗確定是不是沙門氏菌，由于那個時候沒有經驗，所以一直跟在師傅身后，我們先將portant; word-wrap: break-word !important; color: rgb(241, 136, 35);">盲樣接種到營養肉湯以保存菌，然后按照標準劃線接種于BS，HE和沙門氏菌顯色培養基上，同時接種到TTB和SC進行后增菌，當時我們按照標準，一直等培養時間到了，才看平板上長的菌落形態是不是可疑菌落，若可疑，再做生化鑒定和血清學鑒定，同時我們用API20E做生化，查編碼。將TTB和SC繼續劃平板 觀察菌落形態，做法同上。

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不久，公司進行地址變更，我們又接到一個大腸菌群計數盲樣，我們按照作業指導書portant; word-wrap: break-word !important; color: rgb(241, 136, 35);">將凍干粉溶解，然后逐層進行稀釋，做稀釋度，當時我們是一個人做的，然后每個稀釋度和平時一樣，只做了兩個平板，做了七八個稀釋度，可是當結果出來的時候，同一稀釋度不平行，不同稀釋度之間也不成正比，我們只得硬著頭皮往下接BGLB ，還好最后結果對上了，可我卻在不停反思為什么會這樣。

就這樣，我們接下來的幾次認證我一直按照師傅說的，老老實實按照標準做，可是，由于認證專家來的時間緊 ，每次我都發現時間不夠，而且每次我們匆匆忙忙的做，但是結果都不是很確定，我一直在思考我們要怎樣在有限的時間內把盲樣做出來，而且把握能大一點。慢慢的，我的心里有了一點構思，但是還沒有實踐。

剛好，公司進行擴項，專家老師給了我們一管單核細胞增生李斯特氏菌盲樣斜面，這次，我打算將自己的構思運用到實踐中，和以前一樣，portant; word-wrap: break-word !important; color: rgb(241, 136, 35);">我們先將盲樣接種到營養肉湯進行保存，然后劃線接種于李斯特顯色培養基和PALCAM培養基，同時在其他可能致病菌平板上也劃（BS，HE，BP，EMB等），這時候，我并沒有和以前一樣，傻傻的在等平板上長出菌落，而是做革蘭氏染色鏡檢，發現為革蘭氏陽性桿菌，直接把革蘭氏陰性菌排除在外，同時做李斯特特有的生化現象（SIM動力試驗，過氧化氫酶試驗，溶血時間及用單核李斯特生化試劑盒做生化）。通過生化我們發現SIM有動力，過氧化氫酶陽性，但溶血為寬的、輪廓清晰的β-溶血，同時生化，鼠李糖陰性，木糖陽性，發現與單核細胞增生李斯特氏菌生化不符，與伊氏李斯特氏菌相符。待平板上立即長出可疑菌落后，不用等到培養時間，立即上述生化，發現與上述現象相符，最后，我們就很肯定的報是伊氏李斯特氏菌不是單核細胞增生李斯特氏菌，結果正確。

我相信，許多人和我一樣，剛開始做盲樣的時候，緊張，不知所錯，總覺得時間不夠用，所以，我們要善于發現，善于總結，微生物是一個知識積累的過程。

通過前面大大小小多次的盲樣認證，我自己總結了一點經驗。

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portant; word-wrap: break-word !important; color: rgb(241, 136, 35);">如果是像大腸菌群凍干粉類計數的，首先，需要兩組或三組人做對比，要使一個人出了問題，可以看其他人的，然后，多做幾個稀釋度（我們一般做六到八個），每個稀釋度多做幾個平板。

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如果是斜面混合菌種：

①先將盲樣接種到營養肉湯培養，后期如果有問題可以用來做。

②劃線接種于特定平板，也可以多劃幾種，有后增菌的可同時進行后增菌，然后劃平板。

③做革蘭氏染色將菌劃分為兩大類（革蘭氏陽性或陰性，球菌、桿菌或弧菌等），心里有初步判定。

④做特有的生化反應（氧化酶、溶血、動力試驗等）。

⑤用生化試劑鑒定盒再次確認，有些可同時用API20E做。

⑥待平板上長出菌落，立即重復上述生化，再次確認上述結果。

注：API20E可用于鑒定腸桿菌科 和其他革蘭氏陰性桿菌。

    平板上長出菌落立即做生化，不用等到培養時間，節約時間。

以上就是我自己總結的一些經驗，希望可以帶給大家一絲啟發，同時可能也有許多說的不正確的地方，希望大家可以指出。