根據(jù)《中華人民共和國(guó)食品安全法實(shí)施條例》規(guī)定,按照《食品補(bǔ)充檢驗(yàn)方法工作規(guī)定》有關(guān)要求,《小麥粉中三聚硫氰酸三鈉鹽的測(cè)定》、《小麥粉及其面粉處理劑中苯甲羥肟酸的測(cè)定》、《小麥粉中曲酸的測(cè)定》3項(xiàng)食品補(bǔ)充檢驗(yàn)方法已經(jīng)市場(chǎng)監(jiān)管總局批準(zhǔn),現(xiàn)予發(fā)布。
特此公告。
附件1:小麥粉中三聚硫氰酸三鈉鹽的測(cè)定(BJS 202001).docx
附件2:小麥粉及其面粉處理劑中苯甲羥肟酸的測(cè)定(BJS 202002).docx
附件3:小麥粉中曲酸的測(cè)定(BJS 202003).docx
市場(chǎng)監(jiān)管總局
2020年7月29日
附件1
小麥粉中三聚硫氰酸三鈉鹽的測(cè)定
BJS 202001
1 范圍
本方法規(guī)定了小麥粉中三聚硫氰酸三鈉鹽的高效液相色譜測(cè)定方法。
本方法適用于小麥粉中三聚硫氰酸三鈉鹽的測(cè)定。
2 原理
樣品用甲醇提取,采用高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器測(cè)定,外標(biāo)法定量。試樣中檢出三聚硫氰酸三鈉鹽后采用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法進(jìn)行確證。
3 試劑與試藥
除非另有說(shuō)明,本方法所有試劑均為分析純,水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。
3.1 試劑
3.1.1 甲醇(CH3OH):色譜純。
3.1.2 磷酸二氫鉀(KH2PO4)。
3.1.3 磷酸(H3PO4)。
3.1.4 甲酸銨 (HCOONH4):色譜純。
3.1.5 甲酸(HCOOH):色譜純。
3.2 試劑配制
3.2.1 磷酸鹽緩沖溶液(20 mmol/L):稱(chēng)取磷酸二氫鉀2.72 g(3.1.2)(精確至0.001 g),加水800mL完全溶解后,用磷酸(3.1.3)調(diào)節(jié)pH在3.7±0.2之間,用水稀釋至1000 mL。
3.2.2 甲酸銨溶液(5 mmol/L):稱(chēng)取甲酸銨0.26 g(3.1.4)(精確至0.001 g),加水800mL完全溶解后,用甲酸(3.1.5)調(diào)節(jié)pH在3.5±0.2之間,用水稀釋至1000 mL。
3.3 標(biāo)準(zhǔn)品
三聚硫氰酸三鈉鹽:純度不低于98%的標(biāo)準(zhǔn)品或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并發(fā)布的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。其中文名稱(chēng)、英文名稱(chēng)、CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量、結(jié)構(gòu)式見(jiàn)附錄A。
3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
3.4.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(100 ?g/mL):準(zhǔn)確稱(chēng)取三聚硫氰酸三鈉鹽標(biāo)準(zhǔn)品10 mg(精確至0.01mg),置于100 mL容量瓶中,甲醇溶解并定容,混勻,得到濃度為100 ?g/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。-18 ?C避光保存, 有效期30天。
3.4.2 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(10 ?g/mL):準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(3.4.1)5.0 mL于50 mL容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,混勻,得到標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。-18 ?C避光保存,有效期30天。
3.4.3 標(biāo)準(zhǔn)系列工作液:準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)工作液(3.4.2)0.25 mL、0.50 mL、1.0 mL、2.5 mL、5.0 mL和10.0 mL于50 mL容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,混勻,得到標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。濃度分別為0.050 ?g/mL、0.10 ?g/mL、0.20 ?g/mL、0.50 ?g/mL、1.0 ?g/mL和2.0 ?g/mL。現(xiàn)用現(xiàn)配。
4 儀器和設(shè)備
4.1 高效液相色譜儀:配有二極管陣列檢測(cè)器。
4.2 電子天平:感量分別為1 mg和0.01 mg。
4.3 渦旋混合器:轉(zhuǎn)速不低于3000 r/min。
4.4 高速冷凍離心機(jī):轉(zhuǎn)速不低于8000 r/min。
4.5 pH計(jì):精確至0.01。
4.6 往復(fù)式振蕩器。
4.7 濾膜:有機(jī)相,孔徑0.22 μm。
5 分析步驟
5.1 樣品前處理
5.1.1 試樣制備
稱(chēng)取具代表性小麥粉樣品約200 g,混合均勻,貯存于潔凈廣口容器中,干燥避光保存?zhèn)溆谩?br>
5.1.2 試樣處理
稱(chēng)取4 g試樣(精確至0.001 g),置于50 mL具塞離心管中,準(zhǔn)確加入甲醇(3.1.1)20 mL,渦旋3 min,振蕩提取10 min,在4 ?C下8000 r/min離心2 min,轉(zhuǎn)移上清液至另一離心管中,殘?jiān)偌蛹状?0mL,重復(fù)提取1次,合并上清液,渦旋混勻后過(guò)0.22 ?m 有機(jī)相濾膜(4.7),棄去2~5滴初濾液,取續(xù)濾液作為待測(cè)試樣液。
5.2 儀器分析參考條件
a)色譜柱:C18色譜柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)或性能相當(dāng)者。
b)流動(dòng)相:A為20 mmol/L KH2PO4緩沖溶液(3.2.1);B為甲醇(3.1.1),梯度洗脫程序見(jiàn)表1。
c)流 速:1.0 mL/min。
d)柱 溫:35 ?C。
e)檢測(cè)波長(zhǎng):296 nm。
f)進(jìn)樣量:10 μL。
三聚硫氰酸三鈉鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖見(jiàn)附錄B。
表1 流動(dòng)相梯度洗脫程序
5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作
將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液(3.4.3)分別注入高效液相色譜儀中,測(cè)定相應(yīng)的峰面積,以標(biāo)準(zhǔn)系列工作液的濃度為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
5.4 試樣溶液的測(cè)定
將待測(cè)試樣液注入高效液相色譜儀中,得到三聚硫氰酸三鈉鹽色譜峰面積,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得到試樣液中三聚硫氰酸三鈉鹽的濃度。試樣液中三聚硫氰酸三鈉鹽的濃度應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性范圍之內(nèi),超出線(xiàn)性范圍則應(yīng)稀釋試樣后重新進(jìn)行分析。
5.5 定性測(cè)定
試樣液和濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液同時(shí)進(jìn)樣分析,試樣液中被測(cè)物質(zhì)的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間偏差在±2.5%之內(nèi),則可初步認(rèn)定試樣中存在三聚硫氰酸三鈉鹽,需按附錄C方法進(jìn)行確證。
5.6 空白試驗(yàn)
除不加試樣外,均按試樣同法操作。
6 分析結(jié)果的表述
試樣中三聚硫氰酸三鈉鹽的含量按式(1)計(jì)算:
……………………………………………(1)
式中:
X -- 試樣中三聚硫氰酸三鈉鹽的含量,單位為毫克每千克(mg/kg);
c -- 由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得出的試樣液中三聚硫氰酸三鈉鹽的濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);
V -- 試樣提取液體積,單位為毫升(mL);
m -- 試樣質(zhì)量,單位為克(g);
1000 -- 單位換算系數(shù)。
計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。
7 精密度
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。
8 準(zhǔn)確度
本方法在1.0 mg/kg ~10.0 mg/kg添加濃度范圍內(nèi),三聚硫氰酸三鈉鹽的回收率在70%~110%之間。
9 方法檢出限和定量限
當(dāng)稱(chēng)樣量為4.0 g,提取溶液體積為40 mL時(shí),本方法中三聚硫氰酸三鈉鹽的檢出限為0.4mg/kg,定量限為1.0 mg/kg。
附錄A
三聚硫氰酸三鈉鹽相關(guān)信息
表A.1三聚硫氰酸三鈉鹽名稱(chēng)、CAS號(hào)、分子式、分子量、結(jié)構(gòu)式
附件2
小麥粉及其面粉處理劑中苯甲羥肟酸的測(cè)定
BJS 202002
1 范圍
本方法規(guī)定了小麥粉及其面粉處理劑中苯甲羥肟酸的高效液相色譜測(cè)定方法。
本方法適用于小麥粉及其面粉處理劑中苯甲羥肟酸的測(cè)定。
2 原理
試樣中的苯甲羥肟酸用甲醇提取,采用高效液相色譜測(cè)定,外標(biāo)法定量。試樣中檢出苯甲羥肟酸后采用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法進(jìn)行確證。
3 試劑和材料
除非另有說(shuō)明,本方法所有試劑均為分析純,水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。
3.1 試劑
3.1.1 甲醇(CH3OH):色譜純。
3.1.2 磷酸(H3PO4)。
3.1.3 甲酸銨 (HCOONH4):色譜純。
3.2 試液配制
3.2.1 磷酸溶液(0.01%):準(zhǔn)確量取1000 mL水,加入100 ?L磷酸(3.1.2)得到pH在2.9±0.1之間的磷酸溶液。
3.2.2 甲酸銨溶液(5 mmol/L):稱(chēng)取甲酸銨0.26 g(3.1.3)(精確至0.001 g),加水溶解并定容至1000 mL。
3.3 標(biāo)準(zhǔn)品
3.3.1 苯甲羥肟酸:純度不低于98%的標(biāo)準(zhǔn)品或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并發(fā)布的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。其中文名稱(chēng)、英文名稱(chēng)、CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量、結(jié)構(gòu)式見(jiàn)附錄A。
3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
3.4.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:準(zhǔn)確稱(chēng)取苯甲羥肟酸標(biāo)準(zhǔn)品10 mg(精確至0.01 mg),置于50 mL容量瓶中,加甲醇-水溶液(50/50,v/v)溶解并稀釋至刻度,搖勻,得到濃度為200 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,4 ℃避光保存,有效期90天。
3.4.2 標(biāo)準(zhǔn)中間液(20.0 μg/mL):吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(3.4.1)5 mL于50 mL容量瓶中,用甲醇-水溶液(50/50,v/v)稀釋至刻度,搖勻,得到標(biāo)準(zhǔn)中間液,4 ℃避光保存,有效期60天。
3.4.3 標(biāo)準(zhǔn)系列工作液:吸取標(biāo)準(zhǔn)中間液(3.4.2)0.25 mL、0.50 mL、1.25 mL、2.5 mL、5.0 mL和12.5 mL于50 mL容量瓶中,用甲醇-水溶液(50/50,v/v)稀釋至刻度,混勻,得到標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。濃度分別為0.10 μg/mL、0.20 μg/mL、0.50 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL和5.0 μg/mL,4 ℃避光保存,有效期30天。
4 儀器和設(shè)備
4.1 高效液相色譜儀:配有二極管陣列檢測(cè)器。
4.2 電子天平:感量分別為1 mg和0.01 mg。
4.3 pH計(jì):精確至0.01。
4.4 渦旋振蕩器。
4.5 超聲波發(fā)生器。
4.6 高速離心機(jī):轉(zhuǎn)速不低于8000 r/min。
4.7 濾膜:有機(jī)相,孔徑0.22 μm。
5 分析步驟
5.1 試樣制備
稱(chēng)取具代表性小麥粉或面粉處理劑樣品約200 g,混合均勻,貯存于潔凈廣口容器中,干燥避光保存?zhèn)溆谩?br>
5.2 試樣處理
準(zhǔn)確稱(chēng)取試樣2 g(精確至0.001 g),置于50 mL具塞離心管中,準(zhǔn)確加入10 mL甲醇(3.1.1),手動(dòng)振蕩20次,渦旋1 min,超聲提取10 min,在4 ℃下8000 r/min離心5 min,取離心后上清液5 mL,于45 ℃氮?dú)獯抵两桑状?水溶液(50/50,v/v)定容至1 mL,渦旋混勻后過(guò)0.22 ?m有機(jī)相微孔濾膜(4.7),棄去2~5滴初濾液,取續(xù)濾液作為待測(cè)試樣液。
5.3 液相色譜參考條件
a)色譜柱:C18色譜柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)或性能相當(dāng)者。
b)流動(dòng)相:A為0.01%的磷酸溶液(3.2.1),B為甲醇(3.1.1),梯度洗脫程序見(jiàn)表1。
c)流速:1.0 mL/min。
d)檢測(cè)波長(zhǎng):228 nm。
e)柱溫:35 ℃。
f)進(jìn)樣量:20 μL。
苯甲羥肟酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖見(jiàn)附錄B。
表1 流動(dòng)相梯度洗脫程序
5.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作
將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液(3.4.3)分別注入高效液相色譜儀中,測(cè)定相應(yīng)的峰面積,以標(biāo)準(zhǔn)系列工作液的濃度為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
5.5 試樣溶液的測(cè)定
將待測(cè)試樣液注入高效液相色譜儀中,得到苯甲羥肟酸的峰面積,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算得到試樣液中苯甲羥肟酸的濃度。試樣液中苯甲羥肟酸的濃度應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性范圍內(nèi),超出線(xiàn)性范圍應(yīng)稀釋試樣液后重新進(jìn)行分析。
5.6 定性測(cè)定
試樣液和濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液同時(shí)進(jìn)樣分析,試樣液中被測(cè)物質(zhì)的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間偏差在±2.5%之內(nèi),則可初步認(rèn)定試樣中存在苯甲羥肟酸,需按附錄C方法進(jìn)行確證。
5.7 空白試驗(yàn)
除不加試樣外,均按試樣同法操作。
6 分析結(jié)果的表述
試樣中被測(cè)組分的含量按式(1)計(jì)算:
……………………………………………(1)
式中:
X -- 試樣中苯甲羥肟酸的含量,單位為毫克每千克(mg/kg);
c -- 由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算得到的待測(cè)試樣液中苯甲羥肟酸的濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);
V1 -- 試樣提取液體積,單位為毫升(mL);
V3 -- 試樣經(jīng)提取濃縮后的最終定容體積,單位為毫升(mL);
V2 -- 用于濃縮分取的試樣提取液體積,單位為毫升(mL);
m -- 試樣質(zhì)量,單位為克(g);
1000 -- 單位換算系數(shù)。
計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。
7 精密度
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。
8 準(zhǔn)確度
本方法在0.3 mg/kg ~3.0 mg/kg添加濃度范圍內(nèi),苯甲羥肟酸的回收率在70%~110%之間。
9 方法檢出限和定量限
當(dāng)取樣量為2 g,提取溶液體積為10 mL,并濃縮5倍時(shí),本方法中苯甲羥肟酸的檢出限為0.1 mg/kg,定量限為0.3 mg/kg。
附錄A
苯甲羥肟酸相關(guān)信息
表A.1 苯甲羥肟酸名稱(chēng)、CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量、結(jié)構(gòu)式
附件3
小麥粉中曲酸的測(cè)定
BJS 202003
1 范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了小麥粉中曲酸的高效液相色譜測(cè)定方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于小麥粉中曲酸的測(cè)定。
2 原理
用純水提取試樣中曲酸,采用配有二極管陣列檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器的高效液相色譜儀檢測(cè),外標(biāo)法定量。
3 試劑和材料
除另有規(guī)定,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。
3.1 試劑
3.1.1甲醇(CH3OH):色譜純。
3.1.2 磷酸二氫鉀(KH2PO4)。
3.1.3 磷酸(H3PO4)。
3.2 試劑配制
磷酸二氫鉀溶液(0.02 mol/L,pH 3.7):稱(chēng)取2.722 g磷酸二氫鉀(3.1.2),加水溶解并定容至1000 mL,加入磷酸(3.1.3)調(diào)節(jié)pH在3.7 ± 0.1之間,經(jīng)水相微孔濾膜(0.45 μm)過(guò)濾后備用。
3.3 標(biāo)準(zhǔn)品
曲酸標(biāo)準(zhǔn)品英文名稱(chēng)、CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量、結(jié)構(gòu)式見(jiàn)附錄A,純度≥99%。
3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
3.4.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1000 mg/L):準(zhǔn)確稱(chēng)取曲酸標(biāo)準(zhǔn)品100 mg(精確至0.0001 g),加水溶解并轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中,定容至刻度,搖勻,制成濃度為1000 mg/L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,4℃避光保存,有效期3個(gè)月。
3.4.2 標(biāo)準(zhǔn)使用液(10.0 mg/L):準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(3.4.1)1.0 mL于100 mL容量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,制成濃度為10.0 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)使用液,4℃避光保存,有效期3個(gè)月。
3.4.3 標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液:準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)使用液(3.4.2)適量,用水配制成質(zhì)量濃度為0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、5.0 mg/L,或依儀器響應(yīng)和實(shí)際情況配制適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。
4 儀器與設(shè)備
4.1 液相色譜儀:配有二極管陣列檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器。
4.2 分析天平:感量分別為0.01 g和0.0001 g。
4.3 pH計(jì):精度0.01。
4.4 超聲波水浴。
4.5 離心機(jī):轉(zhuǎn)速≥8000 r/min。
5 分析步驟
5.1 試樣提取
稱(chēng)取1 g(精確至0.01 g)試樣于50 mL離心管中,加入20 mL水,超聲提取20 min, 8000 r/min離心10 min。上清液轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,過(guò)水相微孔濾膜(0.45 μm),取續(xù)濾液,待測(cè)。
5.2 儀器參考條件
5.2.1色譜柱:C18柱,4.6 mm×250 mm,5 μm,或同等性能的色譜柱。
5.2.2 流動(dòng)相:甲醇∶磷酸二氫鉀溶液(0.02 mol/L,pH 3.7)= 8:92
5.2.3 流速:1.0 mL/min
5.2.4 檢測(cè)波長(zhǎng):273 nm
5.2.5 柱溫:30 °C
5.2.6進(jìn)樣量:10 μL
5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作
將曲酸標(biāo)準(zhǔn)系列工作液注入高效液相色譜儀中,測(cè)定組分的峰面積。以相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
5.4 試樣溶液的測(cè)定
將試樣溶液注入高效液相色譜儀中,得到相應(yīng)的峰面積。試樣中目標(biāo)化合物色譜峰的保留時(shí)間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時(shí)間相比較,變化范圍應(yīng)在±2.5%之內(nèi)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得到待測(cè)試樣溶液中組分的濃度。
6 空白試驗(yàn)
除不加試樣外,均按試樣同法處理。應(yīng)確認(rèn)不含有干擾待測(cè)組分的物質(zhì)。
7 結(jié)果計(jì)算
試樣中曲酸的含量按式(1)計(jì)算:
………………………………………………(1)
式中:
X-試樣中曲酸的含量,mg/kg;
c-試樣溶液中曲酸的濃度,mg/L;
V-試樣定容體積,mL;
m-試樣質(zhì)量,g;
1000-單位換算。
計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示。曲酸含量≥1 mg/kg時(shí),計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字;曲酸含量<1 mg/kg時(shí)計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。
8 精密度
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。
9 檢出限和定量限
取樣量為1 g,定容體積為25mL時(shí),定量限為2.5 mg/kg,檢出限為1.0 mg/kg。
附錄A
曲酸相關(guān)信息
表A.1 曲酸名稱(chēng)、CAS號(hào)、分子式、分子量、結(jié)構(gòu)式
特此公告。



市場(chǎng)監(jiān)管總局
2020年7月29日
附件1
小麥粉中三聚硫氰酸三鈉鹽的測(cè)定
BJS 202001
1 范圍
本方法規(guī)定了小麥粉中三聚硫氰酸三鈉鹽的高效液相色譜測(cè)定方法。
本方法適用于小麥粉中三聚硫氰酸三鈉鹽的測(cè)定。
2 原理
樣品用甲醇提取,采用高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器測(cè)定,外標(biāo)法定量。試樣中檢出三聚硫氰酸三鈉鹽后采用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法進(jìn)行確證。
3 試劑與試藥
除非另有說(shuō)明,本方法所有試劑均為分析純,水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。
3.1 試劑
3.1.1 甲醇(CH3OH):色譜純。
3.1.2 磷酸二氫鉀(KH2PO4)。
3.1.3 磷酸(H3PO4)。
3.1.4 甲酸銨 (HCOONH4):色譜純。
3.1.5 甲酸(HCOOH):色譜純。
3.2 試劑配制
3.2.1 磷酸鹽緩沖溶液(20 mmol/L):稱(chēng)取磷酸二氫鉀2.72 g(3.1.2)(精確至0.001 g),加水800mL完全溶解后,用磷酸(3.1.3)調(diào)節(jié)pH在3.7±0.2之間,用水稀釋至1000 mL。
3.2.2 甲酸銨溶液(5 mmol/L):稱(chēng)取甲酸銨0.26 g(3.1.4)(精確至0.001 g),加水800mL完全溶解后,用甲酸(3.1.5)調(diào)節(jié)pH在3.5±0.2之間,用水稀釋至1000 mL。
3.3 標(biāo)準(zhǔn)品
三聚硫氰酸三鈉鹽:純度不低于98%的標(biāo)準(zhǔn)品或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并發(fā)布的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。其中文名稱(chēng)、英文名稱(chēng)、CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量、結(jié)構(gòu)式見(jiàn)附錄A。
3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
3.4.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(100 ?g/mL):準(zhǔn)確稱(chēng)取三聚硫氰酸三鈉鹽標(biāo)準(zhǔn)品10 mg(精確至0.01mg),置于100 mL容量瓶中,甲醇溶解并定容,混勻,得到濃度為100 ?g/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。-18 ?C避光保存, 有效期30天。
3.4.2 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(10 ?g/mL):準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(3.4.1)5.0 mL于50 mL容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,混勻,得到標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。-18 ?C避光保存,有效期30天。
3.4.3 標(biāo)準(zhǔn)系列工作液:準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)工作液(3.4.2)0.25 mL、0.50 mL、1.0 mL、2.5 mL、5.0 mL和10.0 mL于50 mL容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,混勻,得到標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。濃度分別為0.050 ?g/mL、0.10 ?g/mL、0.20 ?g/mL、0.50 ?g/mL、1.0 ?g/mL和2.0 ?g/mL。現(xiàn)用現(xiàn)配。
4 儀器和設(shè)備
4.1 高效液相色譜儀:配有二極管陣列檢測(cè)器。
4.2 電子天平:感量分別為1 mg和0.01 mg。
4.3 渦旋混合器:轉(zhuǎn)速不低于3000 r/min。
4.4 高速冷凍離心機(jī):轉(zhuǎn)速不低于8000 r/min。
4.5 pH計(jì):精確至0.01。
4.6 往復(fù)式振蕩器。
4.7 濾膜:有機(jī)相,孔徑0.22 μm。
5 分析步驟
5.1 樣品前處理
5.1.1 試樣制備
稱(chēng)取具代表性小麥粉樣品約200 g,混合均勻,貯存于潔凈廣口容器中,干燥避光保存?zhèn)溆谩?br>
5.1.2 試樣處理
稱(chēng)取4 g試樣(精確至0.001 g),置于50 mL具塞離心管中,準(zhǔn)確加入甲醇(3.1.1)20 mL,渦旋3 min,振蕩提取10 min,在4 ?C下8000 r/min離心2 min,轉(zhuǎn)移上清液至另一離心管中,殘?jiān)偌蛹状?0mL,重復(fù)提取1次,合并上清液,渦旋混勻后過(guò)0.22 ?m 有機(jī)相濾膜(4.7),棄去2~5滴初濾液,取續(xù)濾液作為待測(cè)試樣液。
5.2 儀器分析參考條件
a)色譜柱:C18色譜柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)或性能相當(dāng)者。
b)流動(dòng)相:A為20 mmol/L KH2PO4緩沖溶液(3.2.1);B為甲醇(3.1.1),梯度洗脫程序見(jiàn)表1。
c)流 速:1.0 mL/min。
d)柱 溫:35 ?C。
e)檢測(cè)波長(zhǎng):296 nm。
f)進(jìn)樣量:10 μL。
三聚硫氰酸三鈉鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖見(jiàn)附錄B。
表1 流動(dòng)相梯度洗脫程序
時(shí)間(min) | A(%) | B (%) |
0.1 | 70 | 30 |
5.0 | 70 | 30 |
5.1 | 30 | 70 |
9.0 | 30 | 70 |
9.1 | 70 | 30 |
15.0 | 70 | 30 |
5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作
將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液(3.4.3)分別注入高效液相色譜儀中,測(cè)定相應(yīng)的峰面積,以標(biāo)準(zhǔn)系列工作液的濃度為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
5.4 試樣溶液的測(cè)定
將待測(cè)試樣液注入高效液相色譜儀中,得到三聚硫氰酸三鈉鹽色譜峰面積,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得到試樣液中三聚硫氰酸三鈉鹽的濃度。試樣液中三聚硫氰酸三鈉鹽的濃度應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性范圍之內(nèi),超出線(xiàn)性范圍則應(yīng)稀釋試樣后重新進(jìn)行分析。
5.5 定性測(cè)定
試樣液和濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液同時(shí)進(jìn)樣分析,試樣液中被測(cè)物質(zhì)的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間偏差在±2.5%之內(nèi),則可初步認(rèn)定試樣中存在三聚硫氰酸三鈉鹽,需按附錄C方法進(jìn)行確證。
5.6 空白試驗(yàn)
除不加試樣外,均按試樣同法操作。
6 分析結(jié)果的表述
試樣中三聚硫氰酸三鈉鹽的含量按式(1)計(jì)算:
……………………………………………(1)
式中:
X -- 試樣中三聚硫氰酸三鈉鹽的含量,單位為毫克每千克(mg/kg);
c -- 由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得出的試樣液中三聚硫氰酸三鈉鹽的濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);
V -- 試樣提取液體積,單位為毫升(mL);
m -- 試樣質(zhì)量,單位為克(g);
1000 -- 單位換算系數(shù)。
計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。
7 精密度
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。
8 準(zhǔn)確度
本方法在1.0 mg/kg ~10.0 mg/kg添加濃度范圍內(nèi),三聚硫氰酸三鈉鹽的回收率在70%~110%之間。
9 方法檢出限和定量限
當(dāng)稱(chēng)樣量為4.0 g,提取溶液體積為40 mL時(shí),本方法中三聚硫氰酸三鈉鹽的檢出限為0.4mg/kg,定量限為1.0 mg/kg。
附錄A
三聚硫氰酸三鈉鹽相關(guān)信息
表A.1三聚硫氰酸三鈉鹽名稱(chēng)、CAS號(hào)、分子式、分子量、結(jié)構(gòu)式
名稱(chēng) | CAS號(hào) | 分子式 | 分子量 | 結(jié)構(gòu)式 |
三聚硫氰酸三鈉鹽 Sodium Trithiocyanurate | 17766-26-6 | C3N3Na3S3 | 243.2 | |
附件2
小麥粉及其面粉處理劑中苯甲羥肟酸的測(cè)定
BJS 202002
1 范圍
本方法規(guī)定了小麥粉及其面粉處理劑中苯甲羥肟酸的高效液相色譜測(cè)定方法。
本方法適用于小麥粉及其面粉處理劑中苯甲羥肟酸的測(cè)定。
2 原理
試樣中的苯甲羥肟酸用甲醇提取,采用高效液相色譜測(cè)定,外標(biāo)法定量。試樣中檢出苯甲羥肟酸后采用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法進(jìn)行確證。
3 試劑和材料
除非另有說(shuō)明,本方法所有試劑均為分析純,水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。
3.1 試劑
3.1.1 甲醇(CH3OH):色譜純。
3.1.2 磷酸(H3PO4)。
3.1.3 甲酸銨 (HCOONH4):色譜純。
3.2 試液配制
3.2.1 磷酸溶液(0.01%):準(zhǔn)確量取1000 mL水,加入100 ?L磷酸(3.1.2)得到pH在2.9±0.1之間的磷酸溶液。
3.2.2 甲酸銨溶液(5 mmol/L):稱(chēng)取甲酸銨0.26 g(3.1.3)(精確至0.001 g),加水溶解并定容至1000 mL。
3.3 標(biāo)準(zhǔn)品
3.3.1 苯甲羥肟酸:純度不低于98%的標(biāo)準(zhǔn)品或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并發(fā)布的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。其中文名稱(chēng)、英文名稱(chēng)、CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量、結(jié)構(gòu)式見(jiàn)附錄A。
3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
3.4.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:準(zhǔn)確稱(chēng)取苯甲羥肟酸標(biāo)準(zhǔn)品10 mg(精確至0.01 mg),置于50 mL容量瓶中,加甲醇-水溶液(50/50,v/v)溶解并稀釋至刻度,搖勻,得到濃度為200 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,4 ℃避光保存,有效期90天。
3.4.2 標(biāo)準(zhǔn)中間液(20.0 μg/mL):吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(3.4.1)5 mL于50 mL容量瓶中,用甲醇-水溶液(50/50,v/v)稀釋至刻度,搖勻,得到標(biāo)準(zhǔn)中間液,4 ℃避光保存,有效期60天。
3.4.3 標(biāo)準(zhǔn)系列工作液:吸取標(biāo)準(zhǔn)中間液(3.4.2)0.25 mL、0.50 mL、1.25 mL、2.5 mL、5.0 mL和12.5 mL于50 mL容量瓶中,用甲醇-水溶液(50/50,v/v)稀釋至刻度,混勻,得到標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。濃度分別為0.10 μg/mL、0.20 μg/mL、0.50 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL和5.0 μg/mL,4 ℃避光保存,有效期30天。
4 儀器和設(shè)備
4.1 高效液相色譜儀:配有二極管陣列檢測(cè)器。
4.2 電子天平:感量分別為1 mg和0.01 mg。
4.3 pH計(jì):精確至0.01。
4.4 渦旋振蕩器。
4.5 超聲波發(fā)生器。
4.6 高速離心機(jī):轉(zhuǎn)速不低于8000 r/min。
4.7 濾膜:有機(jī)相,孔徑0.22 μm。
5 分析步驟
5.1 試樣制備
稱(chēng)取具代表性小麥粉或面粉處理劑樣品約200 g,混合均勻,貯存于潔凈廣口容器中,干燥避光保存?zhèn)溆谩?br>
5.2 試樣處理
準(zhǔn)確稱(chēng)取試樣2 g(精確至0.001 g),置于50 mL具塞離心管中,準(zhǔn)確加入10 mL甲醇(3.1.1),手動(dòng)振蕩20次,渦旋1 min,超聲提取10 min,在4 ℃下8000 r/min離心5 min,取離心后上清液5 mL,于45 ℃氮?dú)獯抵两桑状?水溶液(50/50,v/v)定容至1 mL,渦旋混勻后過(guò)0.22 ?m有機(jī)相微孔濾膜(4.7),棄去2~5滴初濾液,取續(xù)濾液作為待測(cè)試樣液。
5.3 液相色譜參考條件
a)色譜柱:C18色譜柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)或性能相當(dāng)者。
b)流動(dòng)相:A為0.01%的磷酸溶液(3.2.1),B為甲醇(3.1.1),梯度洗脫程序見(jiàn)表1。
c)流速:1.0 mL/min。
d)檢測(cè)波長(zhǎng):228 nm。
e)柱溫:35 ℃。
f)進(jìn)樣量:20 μL。
苯甲羥肟酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖見(jiàn)附錄B。
表1 流動(dòng)相梯度洗脫程序
時(shí)間(min) | A(%) | B (%) |
0.0 | 92 | 8 |
2.0 | 92 | 8 |
14.0 | 50 | 50 |
15.0 | 50 | 50 |
15.1 | 92 | 8 |
20.0 | 92 | 8 |
5.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作
將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液(3.4.3)分別注入高效液相色譜儀中,測(cè)定相應(yīng)的峰面積,以標(biāo)準(zhǔn)系列工作液的濃度為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
5.5 試樣溶液的測(cè)定
將待測(cè)試樣液注入高效液相色譜儀中,得到苯甲羥肟酸的峰面積,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算得到試樣液中苯甲羥肟酸的濃度。試樣液中苯甲羥肟酸的濃度應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性范圍內(nèi),超出線(xiàn)性范圍應(yīng)稀釋試樣液后重新進(jìn)行分析。
5.6 定性測(cè)定
試樣液和濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液同時(shí)進(jìn)樣分析,試樣液中被測(cè)物質(zhì)的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間偏差在±2.5%之內(nèi),則可初步認(rèn)定試樣中存在苯甲羥肟酸,需按附錄C方法進(jìn)行確證。
5.7 空白試驗(yàn)
除不加試樣外,均按試樣同法操作。
6 分析結(jié)果的表述
試樣中被測(cè)組分的含量按式(1)計(jì)算:
……………………………………………(1)
式中:
X -- 試樣中苯甲羥肟酸的含量,單位為毫克每千克(mg/kg);
c -- 由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算得到的待測(cè)試樣液中苯甲羥肟酸的濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);
V1 -- 試樣提取液體積,單位為毫升(mL);
V3 -- 試樣經(jīng)提取濃縮后的最終定容體積,單位為毫升(mL);
V2 -- 用于濃縮分取的試樣提取液體積,單位為毫升(mL);
m -- 試樣質(zhì)量,單位為克(g);
1000 -- 單位換算系數(shù)。
計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。
7 精密度
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。
8 準(zhǔn)確度
本方法在0.3 mg/kg ~3.0 mg/kg添加濃度范圍內(nèi),苯甲羥肟酸的回收率在70%~110%之間。
9 方法檢出限和定量限
當(dāng)取樣量為2 g,提取溶液體積為10 mL,并濃縮5倍時(shí),本方法中苯甲羥肟酸的檢出限為0.1 mg/kg,定量限為0.3 mg/kg。
附錄A
苯甲羥肟酸相關(guān)信息
表A.1 苯甲羥肟酸名稱(chēng)、CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量、結(jié)構(gòu)式
名稱(chēng) | CAS號(hào) | 分子式 | 分子量 | 結(jié)構(gòu)式 |
苯甲羥肟酸 Benzohydroxamic acid | 495-18-1 | C7H7NO2 | 137.14 | |
附件3
小麥粉中曲酸的測(cè)定
BJS 202003
1 范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了小麥粉中曲酸的高效液相色譜測(cè)定方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于小麥粉中曲酸的測(cè)定。
2 原理
用純水提取試樣中曲酸,采用配有二極管陣列檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器的高效液相色譜儀檢測(cè),外標(biāo)法定量。
3 試劑和材料
除另有規(guī)定,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。
3.1 試劑
3.1.1甲醇(CH3OH):色譜純。
3.1.2 磷酸二氫鉀(KH2PO4)。
3.1.3 磷酸(H3PO4)。
3.2 試劑配制
磷酸二氫鉀溶液(0.02 mol/L,pH 3.7):稱(chēng)取2.722 g磷酸二氫鉀(3.1.2),加水溶解并定容至1000 mL,加入磷酸(3.1.3)調(diào)節(jié)pH在3.7 ± 0.1之間,經(jīng)水相微孔濾膜(0.45 μm)過(guò)濾后備用。
3.3 標(biāo)準(zhǔn)品
曲酸標(biāo)準(zhǔn)品英文名稱(chēng)、CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量、結(jié)構(gòu)式見(jiàn)附錄A,純度≥99%。
3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
3.4.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1000 mg/L):準(zhǔn)確稱(chēng)取曲酸標(biāo)準(zhǔn)品100 mg(精確至0.0001 g),加水溶解并轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中,定容至刻度,搖勻,制成濃度為1000 mg/L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,4℃避光保存,有效期3個(gè)月。
3.4.2 標(biāo)準(zhǔn)使用液(10.0 mg/L):準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(3.4.1)1.0 mL于100 mL容量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,制成濃度為10.0 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)使用液,4℃避光保存,有效期3個(gè)月。
3.4.3 標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液:準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)使用液(3.4.2)適量,用水配制成質(zhì)量濃度為0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、5.0 mg/L,或依儀器響應(yīng)和實(shí)際情況配制適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。
4 儀器與設(shè)備
4.1 液相色譜儀:配有二極管陣列檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器。
4.2 分析天平:感量分別為0.01 g和0.0001 g。
4.3 pH計(jì):精度0.01。
4.4 超聲波水浴。
4.5 離心機(jī):轉(zhuǎn)速≥8000 r/min。
5 分析步驟
5.1 試樣提取
稱(chēng)取1 g(精確至0.01 g)試樣于50 mL離心管中,加入20 mL水,超聲提取20 min, 8000 r/min離心10 min。上清液轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,過(guò)水相微孔濾膜(0.45 μm),取續(xù)濾液,待測(cè)。
5.2 儀器參考條件
5.2.1色譜柱:C18柱,4.6 mm×250 mm,5 μm,或同等性能的色譜柱。
5.2.2 流動(dòng)相:甲醇∶磷酸二氫鉀溶液(0.02 mol/L,pH 3.7)= 8:92
5.2.3 流速:1.0 mL/min
5.2.4 檢測(cè)波長(zhǎng):273 nm
5.2.5 柱溫:30 °C
5.2.6進(jìn)樣量:10 μL
5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作
將曲酸標(biāo)準(zhǔn)系列工作液注入高效液相色譜儀中,測(cè)定組分的峰面積。以相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
5.4 試樣溶液的測(cè)定
將試樣溶液注入高效液相色譜儀中,得到相應(yīng)的峰面積。試樣中目標(biāo)化合物色譜峰的保留時(shí)間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時(shí)間相比較,變化范圍應(yīng)在±2.5%之內(nèi)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得到待測(cè)試樣溶液中組分的濃度。
6 空白試驗(yàn)
除不加試樣外,均按試樣同法處理。應(yīng)確認(rèn)不含有干擾待測(cè)組分的物質(zhì)。
7 結(jié)果計(jì)算
試樣中曲酸的含量按式(1)計(jì)算:
………………………………………………(1)
式中:
X-試樣中曲酸的含量,mg/kg;
c-試樣溶液中曲酸的濃度,mg/L;
V-試樣定容體積,mL;
m-試樣質(zhì)量,g;
1000-單位換算。
計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示。曲酸含量≥1 mg/kg時(shí),計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字;曲酸含量<1 mg/kg時(shí)計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。
8 精密度
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。
9 檢出限和定量限
取樣量為1 g,定容體積為25mL時(shí),定量限為2.5 mg/kg,檢出限為1.0 mg/kg。
附錄A
曲酸相關(guān)信息
表A.1 曲酸名稱(chēng)、CAS號(hào)、分子式、分子量、結(jié)構(gòu)式
名稱(chēng) | CAS號(hào) | 分子式 | 分子量 | 結(jié)構(gòu)式 |
曲酸 Kojic acid | 501-30-4 | C6H6O4 | 142.11 | |