MOVAS小鼠主動脈血管平滑肌傳代細胞 【細胞貨號】 C0907"選擇正確的培養基：不同的細胞可能培養基不同，甚至不同的文獻可能對相同的細胞培養基成分也是可能不同的。如我當時培養神經干細胞，有文獻就選用neurobase培養基，而我的實驗目的主要是做和氧化方面的，而這種培養基中含有劑成分，此時，我就不得不選擇另外一種不含劑的培養基。瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規則搖晃均勻小心勿造成氣泡，使溫度與成分均一，減少沉淀的發生。勿直接由–20℃直接至37℃ 解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而發生沉淀。熱滅活是指56℃，30分鐘加熱已完全解凍之血清。MOVAS傳代細胞水浴鍋升到56℃后，將血清放入，待溫度升高到56℃后計時，一般5分鐘左右規則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因為會造成沉淀物之顯著增多，且會影響血清之品質。注意更換新血清包括不同批次對細胞的影響。【細胞縮寫】" MOVAS細胞【細胞名稱】 MOVAS(小鼠主動脈血管平滑肌細胞)【背景資料】 見細胞說明書【細胞來源】 細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國內外大學建系【代次】 P4【規格】 復蘇T25培養瓶(一瓶)或凍存1ml凍存管（兩支）"細胞凍存及復蘇基本知識普及：細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時向培養基中加入保護劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜DMSO，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結條件下，細胞內水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷。 采用""慢凍快融""的方法能較好地保證細胞存活。標準冷凍速度開始為-1 到 -2℃/min，當溫度低于-25℃時可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內-196℃。【細胞數】" 1*10（6）【生物安全級別】 1【生物體】 小鼠【組織來源】 主動脈；平滑肌【細胞形態】 紡錘狀【細胞特性】 貼壁【細胞活力】 95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）【細胞檢測】 細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌"細胞常規培養傳代流程請嚴格遵照無菌操作1、吸出原培養瓶中的培養基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2-3ml 0.25%胰酶進行消化細胞注意把握消化時間，通常控制在1-2min2、鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時不建議消化到細胞漂浮去掉胰酶，加6-8ml完全培養基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散3、取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中，添加適當的完全培養基，把細胞懸液打勻，于培養箱中培養4、注意培養基PH值變化情況，定期換液每周2-3次，待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存特別注意：如使用公共實驗室或者初次接觸細胞培養，建議添加雙抗培養1、收到細胞后請盡快更換為含15%血清的新鮮培養基，如因特殊情況需要繼續使用原瓶，請在原瓶培養基中額外添加10%的血清，原瓶培養基的繼續使用時間長不宜超過72小時2、貼壁細胞收到當天切忌立刻消化，請將細胞換液后放置培養箱孵育到第二天再做消化傳代，請優先選擇直徑6cm的培養皿進行傳代培養3、如簽收時出現培養瓶壁破裂，漏液等情況請及時做好照片記錄并聯系實驗室。【培養條件】" 詳見細胞說明書【傳代方法】 建議1:2-1:3 兩天換液一次【凍存條件】 詳見細胞說明書【主要文獻】 請具體查閱相關發表文章細胞培養方面注意的幾點：無菌意識要強：實驗進行前，超凈臺以紫外燈照射30分鐘滅菌，以70 % ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟超凈工作臺風扇運轉數分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以70 % ethanol擦拭無菌操作抬面。無菌操作工作區域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暫時放置，其它個人實驗用品用完應立即拿出。MOVAS傳代細胞實驗用品以70%乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內。實驗操作應在中央無菌區域，一般勿在邊緣區域操作。小心取用無菌之實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約 45°角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。選擇正確的培養基：不同的細胞可能培養基不同，甚至不同的文獻可能對相同的細胞培養基成分也是可能不同的。如我當時培養神經干細胞，有文獻就選用neurobase培養基，而我的實驗目的主要是做和氧化方面的，而這種培養基中含有劑成分，此時，我就不得不選擇另外一種不含劑的培養基。瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發生。勿直接由–20℃直接至37℃ 解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而發生沉淀。熱滅活是指56℃，30分鐘加熱已完全解凍之血清。水浴鍋升到56℃后，將血清放入，待溫度升高到56℃后計時，一般5分鐘左右規則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因為會造成沉淀物之顯著增多，且會影響血清之品質。注意更換新血清（包括不同批次）對細胞的影響。
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