【測定原理】
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯抗原，樣本中的殘留物氯霉素和微孔條上預包被的偶聯抗原競爭抗氯霉素抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物氯霉素的含量成負相關，與標準曲線比較可得出相應殘留物氯霉素的含量。
【試劑盒技術指標】
規 格：96孔/盒
靈 敏 度： 0.05ppb
檢測時間： 75min
樣本定量檢測下限：
腸 衣………………………………………………0.1ppb
蜂 蜜………………………………………………0.1ppb
牛 奶………………………………………………0.05ppb
尿液、血清…………………………………………0.1ppb
組織、肝臟……………………………………… 0.025ppb
飼 料………………………………………………0.15ppb
樣本回收率：
組織、肝臟………………………………………80%±10%
蜂蜜、腸衣………………………………………70%±10%
牛奶、飼料………………………………………85%±15%
尿液、血清………………………………………70%±10%
交叉反應率
氯霉素………………………………………………
甲砜霉素…………………………………………… < 0.1%
氟甲砜霉素…………………………………………< 0.1%
【試劑盒組成】
1、 微量測試孔：1×96孔板（12條×8孔）
2、 標準液X6瓶：（1ml/瓶） 0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb
3、 酶標記物 12ml……………………紅色帽
4、 抗體工作液 7ml…………………… 綠色帽
5、 底物 A 液 7ml…………………… 白色帽
6、 底物 B 液 7 ml…………………… 黑色帽
7、 終 止 液 7 ml…………………… 黃色帽
8、 20X濃縮洗滌液 40ml………………透明帽
9、 2X濃縮復溶液 50ml………………透明帽
【所用儀器、試劑】
具備的儀器：微孔板酶標儀、氮氣吹干裝置、均質器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g ）
微量移液器：單道 20µl-200µl、100µl-1000µl、多道 250µl
試 劑：乙酸乙酯、乙腈、正己烷、去離子水、亞硝基鐵、硫酸鋅、葡萄糖苷酸酶(Merck,Art.No.4114)、醋酸鈉、醋酸
【樣本前處理步驟】
樣本處理前須知
處理任何樣本時，都必須注意：
（a）本試劑盒所檢測的組織樣本包括：動物組織、
禽類和水產組織。eg:雞、鴨、牛、兔、魚、蝦等。
（b）實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
（c）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染，干擾實驗結果。
樣本前處理需配制：
配液1、C液（牛奶樣本使用）：
0.36M 亞硝基鐵（Na2Fe(CN)5•NO•2H2O）10.7g 亞硝 基鐵加去離子水100ml溶解。
配液2、D液（牛奶樣本使用）：
1M硫酸鋅（ZnSO4•7H2O）28.8g硫酸鋅加去離子水100ml溶解。
配液3、 pH4.8 100mM醋酸鈉緩沖液（尿樣本使用）：稱2.4g醋酸鈉和1.2ml醋酸加去離子水500ml溶解混合。
配液4、乙腈-水溶液 V乙腈：VH2O＝84：16
配液5、 將2X濃縮復溶液用去離子水按1：1稀釋。(1份濃縮復溶掖+1份去離子水，用于抗體的稀釋和樣本提取后的復溶)。
（a）組織、肝臟樣本前處理方法
1、 用均質器均質組織樣本；
2、 稱3±0.05g樣本于離心管中，先加入3ml去離子水充分混勻再加入6ml乙酸乙酯，振蕩5min，室溫4000r/min以上，離心10min；
3、 取出4ml上層液體在氮氣流50-60℃水浴中干燥；
4、 加入1 ml正己烷溶解干燥的殘留物，再加1ml稀釋后的復溶液強烈振蕩混合30s，室溫4000r/min以上離心5min。
5、 取50 µl下層相用于分析。
樣本稀釋倍數：0.5
（b）血清血漿
1、 取1ml血清或血漿至試管中，加2ml乙酸乙酯振蕩1min；
2、 靜置使水相與相分層或室溫4000r/min離心5min；
3、 移取上層的乙酸乙酯至另一試管中，用氮氣流50℃水浴中干燥；
4、 殘留物用1 ml稀釋后的復溶液溶解，混合30s；
5、 取50µl用于分析。
樣本稀釋倍數：1
（c） 尿液
1、 移取2ml尿液到離心管中，加pH4.8 100mM醋酸鈉緩沖液0.5ml混合；
2、 加40µl葡萄糖苷酸酶(Merck,Art.No.4114)到稀釋的尿液中，在37℃水解至少2小時（或過夜）；
3、 該溶液恢復至室溫后加入8ml乙酸乙酯混合1min；
4、 室溫4000r/min離心10min，取出4ml上層液體在氮氣下50～60℃干燥；
5、 用1ml稀釋后的復溶液溶解干燥的殘留物，混合30s；
6、 取50µl 用于分析。
樣本稀釋倍數：1
（d）蜂蜜
1、 取2±0.05 g蜂蜜，放入離心管中，用4ml去離子水溶解；
2、 加入4ml乙酸乙酯上下振蕩5min；
3、 室溫4000r/min以上離心10min；
4、 移取2ml上層清澈液到另一離心管中，50-60℃氮氣流下干燥；
5、 用0.5ml稀釋后的復溶液溶解，混合30s；
6、 取50 µl用于分析。
樣本稀釋倍數：0.5 檢測下限：0.025ppb
定量下限：0.1 ppb
注：我們推薦0.1 ppb為陽性樣本的cut off值。
（e）腸衣
1、 用均質器均質樣本注：干樣本需剪碎（長度不超5mm）后再均質，濕樣本需用去離子水漂洗20min以上(去除表面的鹽份)，瀝干后再進行均質。
2、 稱1±0.05g均質后的樣本于離心管中，加入10ml乙酸乙酯，振蕩5min，室溫4000r/min以上，離心10min。
3、 取出5ml上層液體（相當于0.5g的樣本）在氮氣流下50-60℃干燥。
4、 加入1 ml正己烷溶解干燥的殘留物，再加0.5ml稀釋后的復溶液強烈振蕩混合30s，室溫4000r/min以上，離心5min。
5、 去上層相，取下層50 µl用于分析。
樣本稀釋倍數：1
（f）牛奶和奶粉
牛奶樣本處理方法一
1、 牛奶樣本，10℃4000r/min以上離心10min，吸除上層脂肪；
2、 取5ml去除脂肪奶樣至離心管中，加入150µlC液出現沉淀，短暫振蕩后加入150µlD液混合；
3、 15℃4000r/min以上，離心10min，移取上層液；
4、 用稀釋后的復溶液以等體積稀釋上層液，混合30s；
5、 取50µl用于分析。
注：如果離心后仍然渾濁，再重復沉淀過程。
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