供應磺胺類多殘留ELISA試劑盒

磺胺類多殘留ELISA檢測試劑盒 

一、概要

磺胺類（SAs）藥物在畜牧生產中應用十分廣泛，主要在動物疾病防治方面有顯著的療效，但與此同時，這類藥物顯著的毒副作用也引起了人們的廣泛關注。例如：影響泌尿系統功能，引起結晶尿，血尿，等反應及致癌性作。因此國內外對動物性食品中總磺胺以及單個磺胺的的限量做了規定。HPLC或GC-MS一直用作檢測的方法，但是其前處理步驟費用昂貴；而使用酶聯免疫檢測試劑盒方法則可以經濟、快速地檢測。

 本公司生產的磺胺類ELISA試劑盒具有準確、快速、簡便的操作優勢。

二、試驗原理

    本試劑盒采用間接競爭法。酶標板上包被的抗原與加入的標準品（或樣本）中的抗原競爭結合加入的酶標抗體。多余的酶被洗去后，加入的底物在酶催化下反應，試劑呈藍色，加入終止液后呈黃色，在450nm下有吸光值，其吸光值大小與標品（或樣本）中的磺胺多殘留藥物濃度呈反比，通過標準品濃度的對數--吸光值百分比做曲線讀取樣本濃度。

三、適用范圍

可定性、定量檢測肉類、水產、蜂蜜、尿液等樣本中磺胺多殘留藥物的殘留量。

四、交叉反應率

磺胺甲噻二唑……………………………………………100 % 

磺胺嘧啶…………………………………………………110 % 

磺胺噻唑 ………………………………………………＞300% 

酞?；青邕颍≒ST） ……………………………………89.8%

磺胺甲惡唑……………………………………………＞150%

磺胺異惡唑……………………………………………＞150%

磺胺吡啶 ……………………………………………… 55% 

磺胺苯吡啶………………………………………………62%

磺胺間甲氧嘧啶 ………………………………………95% 

磺胺對甲氧嘧啶……………………………………… 85%

磺胺間二甲氧嘧啶…………………………………… 67%

磺胺氯噠嗪 ……………………………………………75%

其它個別磺胺類藥物也存在交叉……………………＜50%

五、檢測步驟

測定前應須知：

1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。

2、使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。

3、在ELISA分析中的再現性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。

4、在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。

操作步驟：

1、將所需試劑從冷藏環境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2、取出需要數量的微孔板，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。

3、洗滌工作液在使用前也需回溫。

4、編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。

5  加標準品/樣本：加標準品/樣本20ml/孔到對應的微孔中，然后加入磺胺多殘留的抗試劑80ml/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環境中反應30min。

6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，用洗滌工作液250ml/孔，充分洗滌4~5次，每次間隔10s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。

7、加酶標物：加入磺胺多殘留的酶標物100ml/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環境中反應30min，取出重復洗板步驟6。

8、顯色：加入底物液A液50ml/孔，再加底物液B液50ml/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環境中反應15～20min。

9、測定：加入終止液50ml/孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，請在5min內讀完數據），測定每孔OD值。(若無酶標儀，則不加終止液用目測法可進行判定)。

六、注意事項

1、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20～25℃）會導致所有標準的OD值偏低。

2、在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會出現標準曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。

3、每加一種試劑前需將其搖勻。

4、反應終止液為1M硫酸，避免接觸皮膚。

5、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。

6、儲存條件

   保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。

7、試劑變質的跡象

發色試劑有任何顏色表明發色劑變質，應當棄之。0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質。

8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為10～15min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到20min（或更長），但不得超過30min。反之，則減短反應時間。

9、該試劑盒反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。

七、貯藏條件及保存期

     貯藏條件：保存試劑盒于2~8℃。

保存期：該產品有效期為12個月。

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