本標準等同采用標準ISO 5508—1978《動植物油脂——脂肪酸甲酯的氣相色譜分析》和標準ISO5509-1978《動植物油脂脂肪酸甲酯的制備》。 1 主題內容與適用范圍
本標準規定了對按照GB 9596.1肉與肉制品游離脂肪含量的測定得到的脂類制備脂肪甲酯的方法以及脂肪酸甲酯混合物成分用氣相色譜進行定性定量測定的方法。
本標準適用于肉和肉制品中脂肪酸的測定。
本標準不適用于測定聚合的脂肪酸。
2 引用標準
GB 9695.1 肉與肉制品 游離脂肪含量的測定。
3 原理
按GB 9695.1從肉和肉制品中提取脂類，并在三氟化硼存在下，進行甘油脂的皂化和游離脂肪酸的酯化，然后進氣相色譜儀，用面積歸一化法測其組成。
4 試劑
所用水為蒸餾水或相當純度的水。
4．1 氫氧化鈉(GB 629)甲醇(GB 683)溶液：0.5mol。
將2g氫氧化鈉溶于100mL含水不超過0.5%(m/m)的甲醇中。溶液放置一段時間后，可能產生少量碳酸鈉白色沉淀而失效。此時重新配制。
4．2 三氟化硼(進口分裝)甲醇(GB 683)溶液：12%~15%(m/m)。
4．3 庚烷(進口分裝)：色譜純。
4．4 石油醚(HG 3-1003)：重蒸餾的，沸程40~60℃。溴值小于1，無殘渣。或已烷(進口分裝)。
4．5 無水硫酸鈉(HG 3-123)。
4．6 氯化鈉(GB 1266)：飽和溶液。
4．7 氮氣：完全干燥，純度不小于99.99%。
4．8 氫氣：純度不小于99.9%，無雜質。
4．9 空氣或氧氣：無雜質。
4．10 參照標準物
與被測定的脂肪酸甲酯相同的脂肪酸甲酯標準物質的混合物。
注：①各種試劑和溶液在進行色譜分析時不得產生干擾脂肪酸甲酯峰的信號。在其色譜分析中，特別是三氟化硼甲醇溶液，可能在色譜圖的20~22碳脂肪酸區域內產生干擾峰。因此每批新試劑或溶劑都應用制備純油酸甲酯，并進行色譜分析。若有干擾峰出現，該試劑應棄之。
②若不存在含有20多或更多碳原子脂肪酸，已烷可代替庚烷。
5 裝置和儀器
5．1 實驗室常規儀器
5．2 滕州華普氣相色譜儀HP-2013配備FID檢測器。
5．3 微處理機或積分儀。
6 試樣
按GB 9695.1的規定，得到的脂肪。
7 分析步驟
7．1 脂肪酸甲酯的制備
三氟化硼有毒，下列操作請在通風櫥里進行，玻璃儀器用后，應立即用水沖洗。
7．1．1 試樣稱取
稱取脂肪約350mg。根據稱取脂肪量的多少按下表選擇燒瓶及試劑。
脂肪量 燒瓶 氫氧化鈉甲醇溶液 三氟化硼甲醇溶液 庚烷
mg mL
100~250 50 4 5 1~3
250~500 50 6 7 2~5
500~750 100 8 9 4~8
750~1000 100 10 12 7~10
7．1．2 皂化
將樣品置于燒杯中，加入適量氫氧化鈉甲醇溶液及助沸劑。然后將冷凝管固定于燒瓶上。
水浴上回流，至沒有脂肪滴下，通常需5~10min。用移液管從冷凝管上部加入適量的三氟化硼甲醇溶液于沸騰的溶液里。
注：在含兩個以上雙鍵的脂肪酸存在時，排掉甲醇溶液和燒瓶中的空氣，可向溶液中導入氨氣數分鐘，皂化時從冷凝管上部持續通入氮氣。
7．1．3 甲酯化
7．1．3．1 接7.1.2繼續煮沸2min。
7．1．3．2 經冷凝管上部加入適量的庚烷，繼續煮沸1min。
停止加熱，冷卻至室溫后，移去冷凝管。加入少量飽和氯化鈉溶液并輕搖燒瓶數次。
繼續加入飽和氯化鈉溶液至燒瓶頸部。
7．1．3．3 吸取上層庚烷溶液約1mL于試管中，加適量無水硫酸鈉脫水。
此溶液含脂肪酸甲酯約100mg/mL，可直接取一定量注入氣相色譜儀測定。
7．1．4 脂肪酸甲酯的貯存
7．1．4．1 制備樣品應盡快分析。不能盡快分析時，脂肪酸甲酯的庚烷溶液短期可貯存于有惰性氣體的冰箱中，不適合較長時間的貯存。
7．1．4．2 不含溶劑的干燥甲酯應立即予以分析。不能分析時，應用惰性氣體封存于冰箱內保存24h；或裝在真空密封管里，在冰箱內可保存更長時間。
7．2 色譜條件
7．2．1 選擇色譜分離條件的原則(對硬脂酸甲酯)。(附錄A)
a.理論塔板數不少于2000；
b.分辨率不小于1.25；
c.出峰時間小時15min。
7．2．2 色譜性：柱長1~3m，柱內徑2~4mm。
7．2．3 填充劑
7．2．3．1 擔體：酸洗硅烷化的硅藻土或其他合適的惰性擔體，其粒度分布均勻，大約在80~100目間。
7．2．3．2 固定相：聚酯型的極性液體(如二甘醇聚丁二酸酯、丁二醇聚丁二酸酯、乙二酸聚乙二酸酯等)、氰基硅酮或其他在氣相色譜中作分離用的固定相。固定相占填充的5%~20%。
7．2．4 柱溫：170℃℃
7．2．5 進樣口溫度：比柱溫高20~50℃。
7．2．6 檢則器溫度：比柱溫高20~50℃。
7．2．7 載氣流速：15~60mL/min。
7．2．8 進樣量：0.4~0.5μL。
7．3 定性分析
面積歸一化法。
8 分析結果的計算
8．1 一般計算
成分i含量由下式計算：
………………………………1()
式中：Ci——成分i的質量百分比：%；
Ai——成分i的的峰面積；
——全部峰面積之和。
一般情況下，根據面積百分比計算的結果可以代表質量百分比。對于某些要求定量準確度高的測定，見8.2。
8．2 校正因子計算法
脂肪酸定量準確度要求很高時，采用校正因子法，將面積百分比換算為質量百分比。
8．2．1 校正因子
校正因子測定，是在與樣品測定相同的操作條件下進行參照標準物的測定，由得到的色譜圖計算。校正因子Ki按下式計算：
…………………………(2)
式中：Ki——組分i的校正因子；
mi——參照標準混合物中成分i的質量；
——參照標準混合物中各種成分的質量總和；
Ai——參照標準混合物中成分i的峰面積；
——參照標準混合物中各種成分峰面積之和。
8．2．2 相對校正因子
相對校正因子Ki’由下式給出：
…………………………(3)
式中：Ki’——相對校正因子；
Kc16——軟脂酸甲酯的校正因子；
Ki——組分i的校正因子。
8．2．3 含量計算
樣品中成分i的含量按下式計算：
……………………(4)
式中：C’i——校正后成分i的質量百分比，%；
A’i——校正后成分i的峰面積；
——校正后樣品中各種成分峰面積之和。
8．3 計算結果保留小數點后一位。
附加說明：
本標準由商業部食品局提出。
本標準由中國肉類食品綜合研究中心歸口。
本標準由中國肉類食品綜合研究中心負責起草。關鍵詞：肉與肉制品 脂肪酸檢測
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