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公司基本資料信息
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微量法
注意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義
漆酶(Laccase)是一種含銅的多酚氧化酶,屬于銅藍(lán)氧化酶家族,廣泛分布于真菌和高等植物中,具有較強(qiáng)的氧化還原能力,在紙漿生物漂白,環(huán)境污染物降解和木質(zhì)纖維素降解以
及生物檢測(cè)方面有非常廣泛的應(yīng)用。
測(cè)定原理
漆酶分解底物ABTS產(chǎn)生ABTS自由基,在420nm處的吸光系數(shù)遠(yuǎn)大于底物ABTS,測(cè)定ABTS 自由基的增加速率,可計(jì)算得漆酶活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、震蕩儀。
試劑組成和配制
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 20mL×1 瓶,4℃保存。
工作液:粉劑×2 瓶,4℃避光保存,臨用前每瓶加 10mL 試劑一溶解。
樣本處理
將新鮮土樣過(guò)40目篩,按照土樣質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱(chēng)取0.1g土樣,加入1mL提取液)加入提取液,30℃震蕩提取30min,于 4℃,10000g,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。
測(cè)定操作
1. 可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到420nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 取微量石英比色皿/96孔板,加入30μL上清液,再加入170μL工作液,混勻立即于420nm
處測(cè)定吸光值,記為 A1。
3. 記錄完數(shù)據(jù)立即 30℃震蕩反應(yīng) 5min 后于420nm 處測(cè)定吸光值,記為 A2。△ A=A2-A1
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