|
公司基本資料信息
|
|||||||||||||||||||||||||||||
微量法
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
α-GAL (EC 3.2.1.22)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，能專一地催化α半乳糖苷鍵的水解，主要參與棉子糖、水蘇糖、蜜二糖和半乳甘露聚糖等半乳糖苷的降解。α-GAL
對于植物種子的萌發至關重要，種子萌發初期，其催化產生的 D-半乳糖通過糖酵解途徑迅速轉化和消耗，為種子的萌發提供初的能量來源，后期則主要參與細胞壁儲藏多糖水解。
測定原理：
α-GAL分解對-硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷生成對-硝基苯酚，后者在400nm有吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算 α-GAL 活性。
自備用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入2.5mL蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存。
試劑二：液體 4mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 13mL×1 瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，
加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至400nm，蒸餾水調零。
2、樣本測定（在EP管或96孔板中依次加入下列試劑）：
| 試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 |
| 試劑一 | 25 |
|
| 蒸餾水 |
| 25 |
| 試劑二 | 35 | 35 |
| 樣本 | 10 | 10 |
| 迅速混勻，放入37℃保溫30min | ||
| 試劑三 | 130 | 130 |
充分混勻， 400nm處測定吸光值 A，計算 ΔA=A 測定-A 對照。每個測定管需設一個對照管。
責權聲明：
①本版塊的所有文章及圖片均為客戶自行編輯，其版權為客戶所有，客戶需保證其編輯的文章及圖片均無侵犯任何第三方的合法權益，如被第三方維權，由客戶承擔全部責任；
② 本網站僅為展示平臺，如要轉載，請與我網站聯系協助獲得授權；
③發布內容如有侵權，請及時聯系我網站進行刪除。
※ 聯系電話：400-854-6788
 |
 |
 |
 |
 |
 |
 |
 |
 |
