非洲豬瘟病毒快速檢測儀實(shí)驗(yàn)操作步驟介紹：CSY-E96D非洲豬瘟病毒快速檢測儀采用固相酶聯(lián)免疫吸附ELISA的原理,即酶聯(lián)免疫法；可快速畜牧類疾病診斷如非洲豬瘟、瘦肉精、禽流感、豬瘟、豬藍(lán)耳、偽狂犬等疾病，廣泛應(yīng)用于養(yǎng)殖場、屠宰場、肉產(chǎn)品深加工企業(yè)、檢驗(yàn)檢疫單位使用。
2007年以來，非洲豬瘟在全球多個(gè)國家發(fā)生、擴(kuò)散、流行，特別是俄羅斯及其周邊地區(qū)。2017年3月，俄羅斯遠(yuǎn)東地區(qū)伊爾庫茨克州發(fā)生非洲豬瘟疫情，疫情發(fā)生地距離我國較近，僅為1000km左右；另外，我國是養(yǎng)豬及豬肉消費(fèi)大國，生豬出欄量、存欄量以及豬肉消費(fèi)量均位于全球首位，每年種豬及豬肉制品進(jìn)口總量巨大，與多個(gè)國家貿(mào)易頻繁；而且，我國與其它國家的旅客往來頻繁，旅客攜帶的商品數(shù)量多、種類雜。因此，非洲豬瘟傳入我國的風(fēng)險(xiǎn)日益加大，一旦傳入，其帶來的直接以及間接損失將不可估量。對此，2017 年 4 月 12 日，我國農(nóng)業(yè)部發(fā)布了關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)非洲豬瘟風(fēng)險(xiǎn)防范工作的緊急通知。
非洲豬瘟病毒快速檢測儀樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
非洲豬瘟病毒快速檢測儀操作步驟：
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置陰、陽性對照孔和樣本孔，陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL；
3.待測樣本孔加待測樣本10μL，樣本稀釋液40μL；
4.隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗原100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光水浴鍋孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在非洲豬瘟病毒快速檢測儀450nm波長處測定各孔的OD值。
2007年以來，非洲豬瘟在全球多個(gè)國家發(fā)生、擴(kuò)散、流行，特別是俄羅斯及其周邊地區(qū)。2017年3月，俄羅斯遠(yuǎn)東地區(qū)伊爾庫茨克州發(fā)生非洲豬瘟疫情，疫情發(fā)生地距離我國較近，僅為1000km左右；另外，我國是養(yǎng)豬及豬肉消費(fèi)大國，生豬出欄量、存欄量以及豬肉消費(fèi)量均位于全球首位，每年種豬及豬肉制品進(jìn)口總量巨大，與多個(gè)國家貿(mào)易頻繁；而且，我國與其它國家的旅客往來頻繁，旅客攜帶的商品數(shù)量多、種類雜。因此，非洲豬瘟傳入我國的風(fēng)險(xiǎn)日益加大，一旦傳入，其帶來的直接以及間接損失將不可估量。對此，2017 年 4 月 12 日，我國農(nóng)業(yè)部發(fā)布了關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)非洲豬瘟風(fēng)險(xiǎn)防范工作的緊急通知。
非洲豬瘟病毒快速檢測儀樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
非洲豬瘟病毒快速檢測儀操作步驟：
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置陰、陽性對照孔和樣本孔，陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL；
3.待測樣本孔加待測樣本10μL，樣本稀釋液40μL；
4.隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗原100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光水浴鍋孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在非洲豬瘟病毒快速檢測儀450nm波長處測定各孔的OD值。
