動物性食品中磺胺類藥物多殘留檢測的固相萃取方法
（Copure® MCX）
一、實驗目的
本研究利用固相萃取法作為豬肉樣品中磺胺類藥物殘留檢測的前處理方法，HPLC法作為檢測手段。Copure ™MCX(60mg/3mL)柱凈化效果良好，回收率滿足測試要求，重現性好，與知名廠商同型號柱性能相當。
二、實驗目標物
磺胺醋酰(CAS:144-80-9)，磺胺吡啶(CAS:144-83-2)，磺胺對甲氧嘧啶(CAS:651-06-9)，磺胺甲基嘧啶(CAS:127-79-7)，磺胺二甲基嘧啶(CAS:57-68-1)
三、應用范圍
本方法適用于動物性食品中磺胺類藥物多殘留的HPLC檢測及確證。
四、參考標準
《GB 29694-2013 食品安全國家標準 動物性食品中13種磺胺類藥物多殘留的測定 高效液相色譜法》。
五、實驗材料
Biocomma®Copure® MCX固相萃取柱60mg/3mL(Cat.No.COMCX360)；W品牌MCX固相萃取柱60mg/3mL。
六、實驗方法
1、樣品提取
稱取豬肉試料(5±0.05) g，于50 mL離心管中，加乙酸乙酯20 mL，渦旋2 min，4000 r/min離心5 min，取上清液于100 mL雞心瓶中，殘渣中加乙酸乙酯20 mL，重復提取一次，合并兩次提取液。雞心瓶中加0.1 mol/L鹽酸溶液4 mL，于40 ℃下旋轉蒸發濃縮至少于3 mL，轉至10 mL離心管中。用0.1 mol/L鹽酸溶液2 mL洗雞心瓶，轉至同一離心管中。再用正己烷3 mL洗雞心瓶，將正己烷轉至同一離心管中，渦旋混和30 s，3000 r/min離心5min， 棄正己烷。再次用正己烷3 mL洗雞心瓶，轉至同一離心管中，渦旋混和30 s，3000 r/min離心5 min，棄正己烷，取下層液備用。
2、SPE柱凈化
(1) 活化：MCX柱依次用甲醇2 mL和0.1 mol/L鹽酸溶液2 mL活化。
(2) 上樣和洗脫：取備用液過柱，控制流速1 mL/min。依次用0.1 mol/L鹽酸溶液1 mL和50%甲醇乙腈溶液2 mL淋洗，棄去淋洗液。用5%氨化甲醇4 mL洗脫，收集洗脫液。
(3) 重新溶解：洗脫液于40 ℃氮氣吹干，加0.1％甲酸乙腈溶液1.0 mL溶解殘余物，濾膜過濾，供高效液相色譜測定。
3、HPLC條件
設備：Waters Alliance 2690
檢測器：Waters 2487 雙波長檢測器；檢測波長：270nm
色譜柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250mm)
流動相：A:乙腈 B:0.1%甲酸水溶液
洗脫方式：梯度洗脫
表1 梯度洗脫條件
流速：1 mL/min
柱溫：室溫
進樣體積:20µL
七、實驗結果
1、0.2mg/kg豬肉基質中磺胺的添加回收結果
表2 0.2mg/kg豬肉基質中磺胺的添加回收結果
表3 W品牌0.2mg/kg豬肉基質中磺胺的添加回收結果
2、添加水平為0.2mg/kg豬肉基質中磺胺檢測色譜圖
圖1 添加水平為0.2mg/kg豬肉基質中磺胺檢測色譜圖
