牛奶中氯霉素檢測的固相萃取方法（Copure®C18）
一、實驗目的
本研究利用固相萃取作為樣品前處理方法，HPLC作為分析方法，檢測牛奶樣品中的氯霉素殘留水平。該方法操作簡便，可簡化樣品前處理過程，減少有機溶劑的使用。
二、實驗目標物
氯霉素(CAS:56-75-7)。
三、應用范圍
本方法適用于動物源性食品中氯霉素的檢測的HPLC檢測及確證。
四、參考標準
《GB/T 22338-2008 動物源食品中氯霉素類藥物殘留量測定》。
五、實驗材料
Biocomma®Copure® C18固相萃取柱500mg/6mL(Cat.No.COC186500)。
六、實驗方法
1、樣品提取
準確稱取牛奶5 g(精確到0.001 g)，加入乙酸乙酯15 mL，渦旋振蕩1 min，搖床振蕩10 min。3000 r/min轉速離心10 min。將上清液轉移至試管中，于45 ℃氮吹吹干，用5 mL乙腈-水溶液(5:95, v/v)溶解，待凈化。
2、SPE柱凈化
(1)活化：C18固相萃取柱使用前依次使用5 mL甲醇和5 mL水活化。
(2)上樣和洗脫：將待凈化液加入已活化好的固相萃取柱中，以1 mL/min的流速過柱，棄去濾液。用2x4 mL乙腈-水溶液(5:95, v/v)淋洗固相萃取柱，棄去淋洗液，抽干10 min。用8 mL乙酸乙酯洗脫固相萃取柱，收集洗脫液。
(3)重新溶解：洗脫液于45 ℃氮吹吹干，用1 mL乙腈-水溶液(2:8, v/v)定溶，0.22 μm微孔濾膜過濾，供高效液相色譜測定。
3、HPLC條件
設備：Waters Alliance 2690
色譜柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250 mm)
檢測器：Waters 2487 紫外檢測器
檢測波長：268 nm
流動相：A：水 B：甲醇
洗脫方式：等度洗脫
表1 等度洗脫條件
流速：1 mL/min
進樣體積：20 μL
七、實驗結果
1、牛奶基質中氯霉素的0.5mg/kg添加回收結果
表2 牛奶基質中氯霉素的0.5mg/kg添加回收結果
2、 添加水平為0.5mg/kg牛奶基質中氯霉素檢測色譜圖
圖1 添加水平為0.5mg/kg牛奶基質中氯霉素檢測色譜圖
