豬肉中激素檢測的固相萃取方法
（Copure®HLB）
一、實驗目的
本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為分析方法，檢測豬肉中激素含量。該方法可簡化樣品的前處理過程，節省有機溶劑的使用，操作簡便。
二、實驗目標物
醋酸甲羥孕酮(CAS:71-58-9)，睪酮（CAS:58-22-0）。
三、應用范圍
本方法適用于豬肉中激素檢測的HPLC檢測及確證。
四、實驗材料
biocomma ®Copure® HLB固相萃取柱60 mg/3 mL(Cat. No. COHLB360)。
五、實驗步驟
1、樣品提取
準確稱取豬肉5.0g于50mL離心管中加入水20mL，甲醇5mL，渦旋1min，4500r/min離心5min，取上清
液，備用。
2、SPE柱凈化
(1)活化：HLB固相萃取柱使用前用3mL甲醇、3mL水活化。
(2)上樣和洗脫：往固相萃取柱中加入提取備用液，棄去流出液；加入3 mL 35%甲醇水溶液淋洗，棄去淋洗液，抽干小柱；加6mL甲醇洗脫，收集洗脫液（整個上樣、洗脫過程保持流速1mL/min）。
(3)重新溶解：40℃緩慢氮氣流條件下吹至近干，用1mL甲醇溶解，經0.22μm濾膜重新過濾，供HPLC測定。
3、HPLC條件
設備：Waters Alliance 2695
色譜柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)
檢測器：Waters 2487 紫外檢測器
檢測波長：230 nm
流動相：A：乙腈B：水
洗脫方式：梯度洗脫
表1:梯度洗脫條件
流速：1.0 mL/min
進樣體積：20μL
六、實驗結果
1、1.0mg/kg豬肉中激素的添加回收結果
表21.0mg/kg豬肉中激素的添加回收結果
2、添加水平為1.0mg/kg豬肉中激素檢測的液相色譜圖
圖1添加水平為1.0mg/kg豬肉中激素檢測的液相色譜圖
