食品中喹諾酮檢測的固相萃取方法
（Copure ® HLB）
一、實(shí)驗?zāi)康?br /> 本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為檢測手段。該方法可簡化樣品的前處理過程，節(jié) 省有機(jī)溶劑的使用，操作簡便。
二、實(shí)驗?zāi)繕?biāo)物
依諾沙星(CAS:74011-58-8)，恩諾沙星(CAS:93106-60-6)，培氟沙星(CAS:70458-95-6)，丹諾沙星 (CAS:119478-55-6)
三、應(yīng)用范圍
本方法適用于食品中喹諾酮的HPLC檢測及確證。
四、參考標(biāo)準(zhǔn)
《GB/T 21312-2007 動物源性食品中14種喹諾酮藥物殘留檢測方法》。
五、實(shí)驗材料
biocomma ® Copure ® HLB固相萃取柱200mg/6mL(Cat.No.COHLB6200)。
六、實(shí)驗方法
1、樣品提取
稱取均質(zhì)牛奶試樣5.0 g試樣(精確至0.001 g)于50 mL離心管中，加入20 mL EDTA-Mellvaine緩沖溶液， 1000 r/ min渦旋混合1 min，超聲提取10 min，10000 r/min離心5 min(溫度低于5 ℃)，提取三次合并上清液。
2、SPE柱凈化
(1)活化：凈化前用6 mL甲醇、6 mL水活化。
(2)上樣和洗脫：將提取液以2 mL/min的速度過柱，棄去濾液，用2 mL5%甲醇水溶液淋洗，棄去淋洗液，將小 柱抽干，再用 6 mL甲醇洗脫并收集洗脫液。
(3)重新溶解：50 ℃緩慢氮?dú)饬鳁l件下吹至近干，用1 mL0.2%甲酸水溶液溶解。1000 r/min渦旋混合1 min， 經(jīng)0.45 µm有機(jī)濾膜過濾后用于上機(jī)測定。
3、HPLC條件
設(shè)備：Waters Alliance 2695
檢測器：Waters 2487 雙波長檢測器 檢測波長：254nm
色譜柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250mm，5 µm)
流動相：A: 乙腈 B: 0.1%甲酸的水溶液
洗脫方式：梯度洗脫
表1 流動相梯度洗脫程序
流速：1 mL/min
柱溫：室溫
進(jìn)樣體積：20 µL
七、實(shí)驗結(jié)果
1、1mg/kg牛奶基質(zhì)中喹諾酮的添加回收結(jié)果
表2 1mg/kg牛奶基質(zhì)中喹諾酮的添加回收結(jié)果
2、 添加水平為1mg/kg牛奶基質(zhì)中喹諾酮檢測色譜圖
圖1 添加水平為1mg/kg牛奶基質(zhì)中喹諾酮檢測色譜圖
（Copure ® HLB）
一、實(shí)驗?zāi)康?br /> 本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為檢測手段。該方法可簡化樣品的前處理過程，節(jié) 省有機(jī)溶劑的使用，操作簡便。
二、實(shí)驗?zāi)繕?biāo)物
依諾沙星(CAS:74011-58-8)，恩諾沙星(CAS:93106-60-6)，培氟沙星(CAS:70458-95-6)，丹諾沙星 (CAS:119478-55-6)
三、應(yīng)用范圍
本方法適用于食品中喹諾酮的HPLC檢測及確證。
四、參考標(biāo)準(zhǔn)
《GB/T 21312-2007 動物源性食品中14種喹諾酮藥物殘留檢測方法》。
五、實(shí)驗材料
biocomma ® Copure ® HLB固相萃取柱200mg/6mL(Cat.No.COHLB6200)。
六、實(shí)驗方法
1、樣品提取
稱取均質(zhì)牛奶試樣5.0 g試樣(精確至0.001 g)于50 mL離心管中，加入20 mL EDTA-Mellvaine緩沖溶液， 1000 r/ min渦旋混合1 min，超聲提取10 min，10000 r/min離心5 min(溫度低于5 ℃)，提取三次合并上清液。
2、SPE柱凈化
(1)活化：凈化前用6 mL甲醇、6 mL水活化。
(2)上樣和洗脫：將提取液以2 mL/min的速度過柱，棄去濾液，用2 mL5%甲醇水溶液淋洗，棄去淋洗液，將小 柱抽干，再用 6 mL甲醇洗脫并收集洗脫液。
(3)重新溶解：50 ℃緩慢氮?dú)饬鳁l件下吹至近干，用1 mL0.2%甲酸水溶液溶解。1000 r/min渦旋混合1 min， 經(jīng)0.45 µm有機(jī)濾膜過濾后用于上機(jī)測定。
3、HPLC條件
設(shè)備：Waters Alliance 2695
檢測器：Waters 2487 雙波長檢測器 檢測波長：254nm
色譜柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250mm，5 µm)
流動相：A: 乙腈 B: 0.1%甲酸的水溶液
洗脫方式：梯度洗脫
表1 流動相梯度洗脫程序
流速：1 mL/min
柱溫：室溫
進(jìn)樣體積：20 µL
七、實(shí)驗結(jié)果
1、1mg/kg牛奶基質(zhì)中喹諾酮的添加回收結(jié)果
表2 1mg/kg牛奶基質(zhì)中喹諾酮的添加回收結(jié)果
2、 添加水平為1mg/kg牛奶基質(zhì)中喹諾酮檢測色譜圖
圖1 添加水平為1mg/kg牛奶基質(zhì)中喹諾酮檢測色譜圖
