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seline; color: rgb(51, 51, 51);">發酵企業一般當發酵產量下降時,懷疑噬菌體污染問題。證明細菌:將發酵液拿來做菌株純化,看看有沒有雜菌落,若有可疑菌落,進一步鏡檢因此可以得證雜菌污染。否則懷疑噬菌體污染。
seline; color: rgb(51, 51, 51);">噬菌體污染:一般如果為烈性噬菌體污染很好判斷(發酵液不能增菌) 但污染了溫和噬菌體就很難處理。
seline; color: rgb(51, 51, 51);">證明:拿已知的原始菌株(無噬菌體感染的)作為寄主做平板涂布,將發酵液直接點植在平板上,并做好位置。記號,培養觀察,在點植處若出現半透明噬菌斑,那肯定是溫和噬菌體污染了。
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seline; color: rgb(51, 51, 51);">噬菌體污染往往是先從發酵罐開始的,然后才波及到種子罐。如果細心觀察可以發現,當你的發酵罐不正常的時候往往種子罐的種子在鏡檢時也有異常菌體出現。
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seline; color: rgb(51, 51, 51);">通氣發酵,空氣過濾器對噬菌體的截留能力不一定很好。一般噬菌體要比空氣過濾器的孔徑還小的多,能夠完全進入到發酵罐中。一般發酵罐的通氣量要比種子罐大,所以也會導致發酵罐比種子罐提前表現出來。
seline; color: rgb(51, 51, 51);">噬菌體防治是個很頭疼的問題,涉及到菌種、空氣、環境、設備等等。積極的方法是選育抗噬菌株。但在平時也,應該做好環境的消毒工作。消毒重點在于發酵罐,管路,及空間。
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seline; color: rgb(51, 51, 51);">噬菌體是一類專性寄生于細菌和放線菌等微生物的病毒,其個體形態極其微小,用常規微生物計數法無法測得其數量。當烈性噬菌體侵染細菌后會迅速引起敏感細菌裂解,釋放出大量子代噬菌體,然后它們再擴散和侵染周圍細胞,終使含有敏感菌的懸液由混濁逐漸變清,或在含有敏感細菌的平板上出現肉眼可見的空斑──噬菌斑。了解噬菌體的特性,快速檢查、分離,并進行效價測定,對在生產和科研工作中防止噬菌體的污染具有重要作用吖。
檢樣可以是發酵液、空氣、污水、土壤等(至于無法采樣而需檢查的對象,可以用無菌水浸濕的棉花涂拭表面作為檢查樣品)。為了易于分離可先經增殖培養,使樣品中的噬菌體數量增加。
采用微生物測定法進行噬菌體檢測,約需12h左右,因而不能及時判斷是否有噬菌體污染。通過快速檢測可大致確定是否有噬菌體污染,以采取必要的防治措施。根據正常發酵(培養)液離心后菌體沉淀,上清液蛋白含量很少,加熱后仍然清亮;而侵染有噬菌體的發酵(培養)液經離心后其上清液中因含有自裂解菌中逸出的活性蛋白,加熱后發生蛋白質變性,因而在光線照射下出現丁達爾效應而不清亮。此法簡單、快速,對發酵液污染噬菌體的判斷亦較準確。但不適于溶源性細菌及溫合噬菌體的診斷,對侵染噬菌體較少的一級種子培養液也往往不適用。
一旦發酵菌浸染噬菌體后,就要從菌種,培養基,環境,發酵系統管路,地溝,污水池,排風口等進行全面的消毒排查,物理消毒方式通常很難將噬菌體消除,通常需要物理和化學方式相結合處理噬菌體污染。
必要暫停發酵培養工作,對整個發酵環境,管路,器材進行消毒處理,可用紫外燈照射加過氧化氫干霧熏蒸的方式對整個發酵場所進行消毒,在不影響生產的情況,可以停止發酵一個月的時間,讓發酵環境的活大腸桿菌消除或減少到限度。
發酵生產環境或實驗室空間化學熏蒸比較安全可靠的方法是過氧化氫氣體滅菌方式,代替傳染有害有毒的甲醛熏蒸。過氧乙酸和甲醛已被否定,目前流行和被接受的是VHP過氧化氫空間滅菌,其廣譜、高效、安全無害,無殘留的消毒方法成為新一代選擇。在解決發酵生產中預防和防治噬菌體浸染問題具有重大意義,這里需增強防重于治的意識,也就是說需要定期的環境空間全面熏蒸消毒。那么過氧化氫干霧滅菌裝置必不可少,因為要經常使用,并且可以短時間內完成消毒,運行成本低,不能造成不良腐蝕影響等。
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