Golgi定位EGFP穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株

貨號(hào)：CY009 Golgi-EGFP穩(wěn)定表達(dá)293細(xì)胞株表達(dá)人B4GALT1基因（GeneID：2683）N端82 AA信號(hào)肽和EGFP的融合蛋白，定位于細(xì)胞高爾基體，該細(xì)胞高爾基體為綠色熒光蛋白標(biāo)記，可用于高爾基體定位實(shí)驗(yàn)或高爾基體定位基因的研究。

細(xì)胞特性：

細(xì)胞來源：HEK293V細(xì)胞（人胚腎細(xì)胞）

表達(dá)蛋白：Golgi定位EGFP蛋白

構(gòu)建載體：pLV-Golgi-EGFP（貨號(hào)VL3505）

篩選抗生素：嘌呤霉素

培養(yǎng)基：DMEM高糖培養(yǎng)基+10%FBS

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

以25cm培養(yǎng)瓶傳代為例。

1、傳代前將細(xì)胞培養(yǎng)液、PBS和胰蛋白酶溫浴到37℃。

2、吸去細(xì)胞培養(yǎng)液。

3、用PBS漂洗1到2次。

4、加入3ml胰蛋白酶，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶，使胰蛋白酶均勻覆蓋細(xì)胞。吸去胰蛋白酶，將培養(yǎng)瓶放置在細(xì)胞培養(yǎng)箱中，37攝氏度消化。由于配制的胰蛋白酶活力有差別，消化時(shí)間可用30秒到1分鐘。應(yīng)在倒置顯微鏡下觀察，看到細(xì)胞分開及稍微變圓即可。

5、加入5ml 細(xì)胞培養(yǎng)基，用吸管輕柔吹打分散細(xì)胞。

6、按1:4到1:5接種細(xì)胞。

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