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公司基本資料信息
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iStop技術(shù)基于CRISPR單堿基基因突變技術(shù)CBE（CRISPR-dependent cytosine base editor）（1）。CBE技術(shù)在不依賴DNA雙鏈斷裂的前提下，特異性實現(xiàn)基因組C>T堿基突變，將CBE技術(shù)應(yīng)用于基因敲除時，可以實現(xiàn)精確地將四個密碼子（CAA、CAG、CGA 和 TGG）轉(zhuǎn)換為終止密碼子（TAA、TAG、TGA）（圖1）。
目前主要的CRISPRCas9基因敲除方法主要有鄰端連接法（NHEJ）和重組修復法（HR）兩種。二者均依賴Cas9蛋白切割造成基因組DNA雙鏈斷裂后的修復反應(yīng)。而DNA雙鏈斷裂是嚴重的DNA損傷，激活DNA損傷檢測，導致細胞死亡。Cas9蛋白的非特異切割也會引起基因組非靶點位置的雙鏈斷裂，從而導致非特異性的DN**段丟失。iStop基因敲除不會產(chǎn)生DNA雙鏈斷裂，避免了產(chǎn)生激烈的DNA損傷應(yīng)激，基因敲除過程溫和可控。
定點突變基因敲除細胞株優(yōu)點：
1)敲除過程中不引起DNA雙鏈斷裂，不會引起細胞應(yīng)激導致狀態(tài)改變或者大片段DNA缺失等不可控突變。
2)對細胞的干擾。細胞遺傳背景清晰。
3)不殘留抗性基因等篩選標簽。
1、iStop基因敲除CRISPRCBEmax載體
CRISPRCBEmax載體表達Cas9單鏈切割突變體和CBE酶，實現(xiàn)細胞基因組定點C>T突變。需配合sgRNA表達載體使用。
| CR3200-1 | pCBE4max-Cas9nick(2A)puro |
| CR3200-2 | pCBE4max-Cas9nick-spG(2A)puro |
| CR3200-3 | pCBE4max-Cas9nick-spRY(2A)puro |
2、sgRNA表達載體
經(jīng)過細胞基因敲除實驗驗證的iStop基因基因敲除載體。具體請咨詢客服。
3、iStop基因敲除細胞株
經(jīng)過基因組PCR測序或者測序+WB驗證的iStop基因敲除細胞株。
| 貨號 | 名稱 | 敲除基因ID | 細胞 | 敲除方法 | 驗證 |
| CR3220-1 | CD274基因敲除HEK293V細胞株 | 29126 | HEK293V | iStop | 測序 |
| CR3220-2 | CD274基因敲除MDA-MB-231細胞株 | 29126 | MDA-MB-231 | iStop | 測序 |
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