1、毒性測試替代方法的基本概念
使用沒有知覺的實驗 材料代替活體動物、或使 用低等動物代替高等動物 進行試驗，并能獲得與動 物實驗相同的結果的科學方法。
2、替代方法的主要內容：3Rs
替代（Replacement, methods which avoid or replac the use of animals） 使用沒有知覺的實驗材料代替活體動物、或使用低等動物代替高等動物進行試 驗，并能獲得與動物實驗相同的結果的科學方法。
減少（Reduction, methods which minimize the number of animals used per experiment） 使用較少的動物（絕對減少）獲得同樣的數據；或使用同等數量的動物（相對 減少）獲得更多的數據。
優化（Refinement, which minimize suffering and improve animal welfare） 在試驗動物生產和使用過程中，通過改善操作過程，提供良好的生活條件，盡 量減少動物的痛苦和不安，保證實驗數據的可靠性。
3、主張替代方法的理由：
A. 動物保護組織的倫理；
B. 動物實驗方法的不確定性：在藥效學試驗中，90%以上經過動物 實驗證實有效的藥物，在臨床試驗中沒有獲得肯定的結果。在藥物的臨床前安全評價中，由于種屬差異的限制，很多實驗結果（如免疫原性/免疫毒性，致癌試驗，生殖毒理等）沒有臨床實驗的指導意義。缺乏理想的動物模型，本身的任何結 果都存在不確定性，使動物實驗的價值降低。
C. 經濟成本和運營的要求：在藥物的臨床前安全評價中，用于購買動物和實施動物實驗的費用占整個安評費用的50%。動物實驗的周期長，運營效率低，延誤臨床試驗和上市時間，使藥物的成本增加。
D. 替代實驗方法的發展；
E. 國際接軌
4、推行替代方法的困難：
科學上：
① 避免使用動物與科學研究的需要相矛盾時，替代方法的任何理由都不具備挑戰價值。
② 3Rs本身存在有缺陷，缺乏可操作性。
人類倫理上：
① 盡管動物實驗的價值具有不確定性，但是，它是為了保護人類健康或臨床前毒理學研究和安全評價中，所能利用的終結工具。
② 任何政府的政策都不會為了保護動物而增加人類的危險，或承擔潛在的責任。
5、3Rs的主要方法和技術 - 體外 in vitro & 電腦模型 in silico
替代Replacement：
組織培養Tissue culture
離體器官灌注Perfused organs
組織切片Tissue slices
細胞組分Cellular fractions
亞細胞組分Subcellular fractions
減少Reduction：
計劃和實施過程中正確選擇實驗策略；
控制實驗中使用動物的變化；
仔細設計和分析實驗；
計算機信息。
優化Refinement：
非侵入式技術Non-invasive techniques；
減輕疼痛的麻醉和鎮痛方案；
訓練動物在實驗過程中主動配合；
動物住宿和環境條件優渥。
6、替代方法的現狀：
研究進展與相關投入： 各個發達國家研究成果頻繁報道，相關投入有增加趨勢。我國提倡替代方法科學家認為，如不迎頭趕上，會受到相關研究技術壁壘的影響。
各國使用動物數量： 沒有減少，甚或增加，而且，不但數量增加，內涵更加復雜，如轉基因動物模型。
各國、各地區相關組織及法規： 在發達國家，只要涉及動物實驗的內容，包括民間和政府機構，在其指南中，都會有接受替代方法理念的陳述，但是，對于實施細則和步驟、時間表等， 均沒有強硬規定。（化妝品除外）
中國：2015年中國毒理學會主辦了第一屆毒性測試替代方法與轉化毒理學（國際）學術研討會，此后每年舉辦一次，今年將于10月9-12日在廣州召開第四屆研討會。但農藥登記方面，并沒有相應法規要求用替代方法。
印度：只有化妝品注冊時用OECD 442B進行皮膚致敏實驗。農藥登記領域沒聽說CIB有關于替代方法的要求。
墨西哥：農藥登記中，COFEPRIS僅接受使用哺乳動物進行的毒理實驗（體內）。
美國：2018年4月10日，EPA官員發布消息稱，化學品和農藥生產者可以提交不使用實驗動物的皮膚致敏性研究報告用于登記申請。 替代實驗包括2種細胞實驗，1種in chemico assay，可聯合使用，以替代局部淋巴結測定（LLNA，此法將受試化學品或農藥施于小鼠耳朵上）。
阿根廷：替代方法已用于化妝品注冊領域，但在農化領域，SENASA短期內不會接受新的體外測試方法，只有皮膚致敏實驗指南OECD 406有可能會用OECD 442代替。
巴西：最早于2014年提出毒性測試替代方法的要求并于2016年做了補充，要求實驗室在5年之內逐步采用替代方法。
以下重點介紹巴西的毒性測試具體替代方法
巴西的科技創新部于2014年9月24日承認了國家動物控制委員會（CONCEA）發布的動物實驗毒性測試替代方法規范（Normative resolution No. 18），并要求巴西境內的實驗室在5年內逐步替換或采用這些替代方法。
該規范中列出了17種替代方法，分為7個組。
第一組：皮膚刺激性/腐蝕性
第二組：眼睛刺激性/腐蝕性
第三組：光毒性 Phototoxicity
OECD TG 432：in vitro 3T3 NRU Phototoxicity test 化學品體外3T3中性紅攝取光毒性試驗方法
第四組：皮膚吸收 dermal absorption
OECD TG 428：Skin absorption: in vitro method 皮膚吸收：體外法
第五組：皮膚致敏性
第六組：急性經口
第七組：遺傳毒性genotoxicity
國家動物控制委員會（CONCEA）于2016年8月18日發布了第二批替代方法規范（Normative resolution No. 31），該規范中列出了新增的7種替代方法，分為4個組。
第一組：眼睛刺激性/腐蝕性
第二組：皮膚致敏性
第三組：繁殖毒性
第四組：評估注射產品熱原污染（contaminação pirogênica em produtos injetáveis）
Bacterial endotoxin test 細菌內毒素檢查法（巴西藥典Brazilian Pharmacopeia）。
關于以上替代方法，巴西相關政府部門也指出，沒有一種單一的體外替代方法能完全取代動物實驗的方法。不過，利用分階段測試戰略，聯合使用替代方法可能會逐步取代動物的體內實驗。
日期：2018-10-18
使用沒有知覺的實驗 材料代替活體動物、或使 用低等動物代替高等動物 進行試驗，并能獲得與動 物實驗相同的結果的科學方法。
2、替代方法的主要內容：3Rs
替代（Replacement, methods which avoid or replac the use of animals） 使用沒有知覺的實驗材料代替活體動物、或使用低等動物代替高等動物進行試 驗，并能獲得與動物實驗相同的結果的科學方法。
減少（Reduction, methods which minimize the number of animals used per experiment） 使用較少的動物（絕對減少）獲得同樣的數據；或使用同等數量的動物（相對 減少）獲得更多的數據。
優化（Refinement, which minimize suffering and improve animal welfare） 在試驗動物生產和使用過程中，通過改善操作過程，提供良好的生活條件，盡 量減少動物的痛苦和不安，保證實驗數據的可靠性。
3、主張替代方法的理由：
A. 動物保護組織的倫理；
B. 動物實驗方法的不確定性：在藥效學試驗中，90%以上經過動物 實驗證實有效的藥物，在臨床試驗中沒有獲得肯定的結果。在藥物的臨床前安全評價中，由于種屬差異的限制，很多實驗結果（如免疫原性/免疫毒性，致癌試驗，生殖毒理等）沒有臨床實驗的指導意義。缺乏理想的動物模型，本身的任何結 果都存在不確定性，使動物實驗的價值降低。
C. 經濟成本和運營的要求：在藥物的臨床前安全評價中，用于購買動物和實施動物實驗的費用占整個安評費用的50%。動物實驗的周期長，運營效率低，延誤臨床試驗和上市時間，使藥物的成本增加。
D. 替代實驗方法的發展；
E. 國際接軌
4、推行替代方法的困難：
科學上：
① 避免使用動物與科學研究的需要相矛盾時，替代方法的任何理由都不具備挑戰價值。
② 3Rs本身存在有缺陷，缺乏可操作性。
人類倫理上：
① 盡管動物實驗的價值具有不確定性，但是，它是為了保護人類健康或臨床前毒理學研究和安全評價中，所能利用的終結工具。
② 任何政府的政策都不會為了保護動物而增加人類的危險，或承擔潛在的責任。
5、3Rs的主要方法和技術 - 體外 in vitro & 電腦模型 in silico
替代Replacement：
組織培養Tissue culture
離體器官灌注Perfused organs
組織切片Tissue slices
細胞組分Cellular fractions
亞細胞組分Subcellular fractions
減少Reduction：
計劃和實施過程中正確選擇實驗策略；
控制實驗中使用動物的變化；
仔細設計和分析實驗；
計算機信息。
優化Refinement：
非侵入式技術Non-invasive techniques；
減輕疼痛的麻醉和鎮痛方案；
訓練動物在實驗過程中主動配合；
動物住宿和環境條件優渥。
6、替代方法的現狀：
研究進展與相關投入： 各個發達國家研究成果頻繁報道，相關投入有增加趨勢。我國提倡替代方法科學家認為，如不迎頭趕上，會受到相關研究技術壁壘的影響。
各國使用動物數量： 沒有減少，甚或增加，而且，不但數量增加，內涵更加復雜，如轉基因動物模型。
各國、各地區相關組織及法規： 在發達國家，只要涉及動物實驗的內容，包括民間和政府機構，在其指南中，都會有接受替代方法理念的陳述，但是，對于實施細則和步驟、時間表等， 均沒有強硬規定。（化妝品除外）
中國：2015年中國毒理學會主辦了第一屆毒性測試替代方法與轉化毒理學（國際）學術研討會，此后每年舉辦一次，今年將于10月9-12日在廣州召開第四屆研討會。但農藥登記方面，并沒有相應法規要求用替代方法。
印度：只有化妝品注冊時用OECD 442B進行皮膚致敏實驗。農藥登記領域沒聽說CIB有關于替代方法的要求。
墨西哥：農藥登記中，COFEPRIS僅接受使用哺乳動物進行的毒理實驗（體內）。
美國：2018年4月10日，EPA官員發布消息稱，化學品和農藥生產者可以提交不使用實驗動物的皮膚致敏性研究報告用于登記申請。 替代實驗包括2種細胞實驗，1種in chemico assay，可聯合使用，以替代局部淋巴結測定（LLNA，此法將受試化學品或農藥施于小鼠耳朵上）。
阿根廷：替代方法已用于化妝品注冊領域，但在農化領域，SENASA短期內不會接受新的體外測試方法，只有皮膚致敏實驗指南OECD 406有可能會用OECD 442代替。
巴西：最早于2014年提出毒性測試替代方法的要求并于2016年做了補充，要求實驗室在5年之內逐步采用替代方法。
以下重點介紹巴西的毒性測試具體替代方法
巴西的科技創新部于2014年9月24日承認了國家動物控制委員會（CONCEA）發布的動物實驗毒性測試替代方法規范（Normative resolution No. 18），并要求巴西境內的實驗室在5年內逐步替換或采用這些替代方法。
該規范中列出了17種替代方法，分為7個組。
第一組：皮膚刺激性/腐蝕性
第二組：眼睛刺激性/腐蝕性
第三組：光毒性 Phototoxicity
OECD TG 432：in vitro 3T3 NRU Phototoxicity test 化學品體外3T3中性紅攝取光毒性試驗方法
第四組：皮膚吸收 dermal absorption
OECD TG 428：Skin absorption: in vitro method 皮膚吸收：體外法
第五組：皮膚致敏性
第六組：急性經口
第七組：遺傳毒性genotoxicity
國家動物控制委員會（CONCEA）于2016年8月18日發布了第二批替代方法規范（Normative resolution No. 31），該規范中列出了新增的7種替代方法，分為4個組。
第一組：眼睛刺激性/腐蝕性
第二組：皮膚致敏性
第三組：繁殖毒性
第四組：評估注射產品熱原污染（contaminação pirogênica em produtos injetáveis）
Bacterial endotoxin test 細菌內毒素檢查法（巴西藥典Brazilian Pharmacopeia）。
關于以上替代方法，巴西相關政府部門也指出，沒有一種單一的體外替代方法能完全取代動物實驗的方法。不過，利用分階段測試戰略，聯合使用替代方法可能會逐步取代動物的體內實驗。
日期：2018-10-18
