VitaFast® Vitamin B3 (Niacin)簡介VitaFast® Vitamin 煙酸試劑盒簡單易用，采用微生物方法，在微孔板種定量檢測食品、藥品和飼料中的煙酸總量（包括添加和原生煙酸）。所有所需的試劑均包含在試劑盒中。本試劑盒共能提供96次檢測（包括標準品）。使用ELISA reader (610 - 630 nm 或者540 - 550 nm)進行讀數。樣品處理：液體樣品：無菌過濾、稀釋固體樣品：均質樣品、提取（離心）、無菌過濾和稀釋含原生煙酸的樣品處理：固體樣品：均質樣品、酸處理、提取（離心）、無菌過濾和稀釋所需時間：試驗過程…………………………………………約60分鐘評價時間………………………………………….2分鐘孵育： 37 °C黑暗條件下44 – 48小時標準品范圍： 0.016－0.160 mg / 100g（ml）回收率： 90－105％Intra-assay CV for standards: < 10 %Inter-assay CV for standards: < 10 %1. 產品用途VistaFast®煙酸微孔板檢測試劑盒是利用微生物方法，用于定量檢測食品、藥品和飼料中的煙酸總量（包括添加和原生煙酸）。本微生物檢測系統符合標準。2. 檢測原理煙酸是從樣品稀釋提取所獲得的。將稀釋了的提取物和煙酸檢測培養基加入包被有
植物乳酸桿菌Lactobacillus plantarum (ATCC Nr. 8014)的微孔中。則Lactobacillus plantarum的生長狀況取決于煙酸的含量。添加V煙酸作為標準或者作為樣品混合物，細菌會一直生長直至煙酸被消耗殆盡。孵育條件應為37 °C黑暗條件下孵育44-48小時。細菌生長時新陳代謝的強度和煙酸的含量形成關系并可以繪制稱標準曲線，通過ELISA reader在610 - 630 nm (或者540 - 550 nm)讀取結果。3．檢測說明
水質在整個測試過程中起著十分重要的作用。本試劑盒中帶有作為溶劑的無菌蒸餾水，用于重組、稀釋標準品和樣品的提取。附加的蒸餾水在以上過程中都是必不可少的。要求整個檢測過程中保持
無菌操作。所使用的玻璃器皿保證無化學殘留物、清潔劑、化學物質和微生物污染。因此，玻璃器皿使用前先用3 mol / l的鹽酸漂洗，然后再用蒸餾水250 °C (482 °F)條件下加熱1小時。在使用前回至室溫。
樣品制備和提取可以不用在無菌條件下進行。樣品的過濾、稀釋與檢測前的準備工作則與整個檢測過程一樣必須在無菌條件下進行。檢測的每一個步驟都需要
校正。標準品和樣品應該進行3次檢測（注意：官方標準中推薦3次檢測方法）。未知樣品應該用2份提取物的稀釋液檢測（誤差應該小于10%）。如果在進一步稀釋時煙酸提高，則可能含有抑制劑，比如重金屬或者抗生素。4. 提供試劑每個試劑盒中包含足夠進行96次試驗的材料和標準品每個試劑盒中包含：1 × 96孔微孔板，包被有 Lactobacillus rhamnosus (ATCC Nr. 7469)3 × 無菌蒸餾水 (30 ml) ，用于準備檢測媒介、標準品和樣品提取稀釋液3 × 煙酸檢測媒介 (固體)3 × 煙酸標準品 (固體)3 × 煙酸緩沖液 (液體)3 × 粘性箔1 × 微孔板固定器5. 需要試劑但試劑盒種不提供 −黑暗條件下的培養箱，37 °C (98.6 °F)−90 -100 °C (194 - 212 °F)水浴，或者高壓滅菌鍋−ELISA reader 610 - 630 nm (540 - 550 nm)−pH 測量儀−離心機，大約10000 × g−刻度移液槍 20 - 200 µl; 100 - 1000 µl−滅菌微量移液槍 tips 20 - 200 µl and 100 - 1000 µl−無菌試管 1.5 - 2.0 ml−移液槍 5 or 10 ml−帶帽的無菌離心機管 (15 and 50 ml)−帶無菌注射器的0.2 µm無菌濾膜−雙蒸水用于樣品提取(available at ifp)−0.1mol / l HCl−2 mol / l NaOH (0.8 g 溶解于100 ml水中) 檢測原生煙酸所需試劑−1mol / l HCl−濃縮NaOH（40g / ml）6．用戶須知−檢測培養基有可能刺激眼睛、皮膚和隔膜−完成試驗后須根據規章處理檢測儀器（如使用高壓滅菌鍋）7．貯藏條件試劑盒應存放在2－8℃條件下處理過的試劑（標準品、培養基）和煙酸緩沖液應馬上使用，并在檢測后丟棄。將未使用的微孔板條放回原來的箔袋中，并與干燥劑一起重新封好，放在2－8℃溫度下。微孔板須防止受潮或受到其他污染。請勿在試劑盒標注的有效期之后使用。 8．試劑失效的跡象空白的吸光度值大于標準品1。濃度標準品的吸光度值小于0.6（630nm）。 9．樣品處理 樣品應儲存在4℃、避光條件下。檢測富集營養樣品中的
游離煙酸時，熱水提取方法通常就足夠了。但是富集營養的飲料可以在過濾之后直接使用。由于使用熱水提取，所以
原生煙酸只能被部分檢測。對于檢測原生煙酸總量，樣品應用酸水解處理。
樣品提取時需要1g或1ml樣品溶解于40ml雙蒸水或提取溶液中。相當于樣品的稀釋倍數為40，這個稀釋倍數已經包括在標準曲線中。樣品提取后需要
進一步稀釋。稀釋倍數取決于由標準曲線中間部分顯示的標準濃度，它是除以其含量獲得（詳見產品標簽或認證，每100g或100ml濃度）。至于涉及到膠囊或藥片時，濃度時常表達為“/片膠囊”，此時濃度必須轉化成“/100g”（詳見11.的計算示例）。這個稀釋倍數在計算結果的時候必須考慮。 樣品提取時使用無菌濾紙（0.2μm）進行過濾，此時。如果由于固體顆粒或者渾濁導致過濾不順利，則在無菌過濾之前應先離心（至少在8000g的離心力下離心5分鐘）。樣品提取液可以在提取當天使用，使用之前應避光保存。提取稀釋液應馬上使用。9.1.液體樣品（富含維生素的果汁、健康飲品）加入1ml樣品至50ml無菌離心管中，準確加入雙蒸水至40ml，搖勻。使用無菌0.2μm濾紙過濾1.0～1.5ml樣品到一個無菌試管中。是否進一步稀釋則取決于濃度范圍（詳見計算示例中的稀釋倍數）。9.2.含維生素的可溶固體樣品（粉末、藥片）稱取1g樣品至50ml無菌試管，用雙蒸水準確加至40ml刻度。搖勻至樣品溶解。用0.2μm無菌濾紙過濾1.0～1.5ml樣品至一無菌試管中。是否進一步稀釋則取決于濃度范圍（詳見計算示例中的稀釋倍數）。9.3.維生素膠囊、藥片首先膠囊或藥片的重量必須確定（平均5～10個膠囊或藥片）。藥片用研缽或攪拌機均質，膠囊須切開并取出其中的顆粒進行試驗。稱取1g藥片或切開1個膠囊至一個50ml無菌離心管中，用0.1mol / l的HCl加至30ml，搖勻。在90～100℃水浴中提取30分鐘。在提取時試管須振蕩至少5次。當然期間必須保證試管是否充分封閉。迅速降溫至30℃以下。用2mol / l 的NaOH調整pH值至6.0～7.0。加無菌水精確至40ml。使用0.2μm無菌濾紙過濾1.0～1.5ml樣品至一個無菌試管中。是否進一步稀釋則取決于濃度范圍（詳見計算示例中的稀釋倍數）。9.4 含維生素的谷物、嬰兒食品、面包、面粉、食品添加劑均質樣品，稱量1g樣品至一50ml離心管中，用雙蒸水加至40ml，搖勻。在90～100℃水浴中提取30分鐘。在提取時試管須振蕩至少5次。當然期間必須保證試管是否充分封閉。迅速降溫至30℃以下。使用0.2μm無菌濾紙過濾1.0～1.5ml樣品至一個無菌試管中。是否進一步稀釋則取決于濃度范圍（詳見計算示例中的稀釋倍數）。9.5.原生煙酸提取復合物時，檢測含原生煙酸的樣品必須先經過用酸處理。稱量1g樣品至至一個50ml無菌離心管中，用1mol / l的鹽酸加至30ml，搖勻。在90～100℃水浴中提取3小時。當然期間必須保證試管是否充分封閉。水浴提取期間離心管必須至少振蕩5次。迅速降溫至30℃以下。用固體或2mol / l 的NaOH調整pH值至5.0～6.0。用雙蒸水準確加至40ml處。使用0.2μm無菌濾紙過濾1.0～1.5ml樣品至一個無菌試管中。是否進一步稀釋則取決于濃度范圍（詳見計算示例中的稀釋倍數）。10.檢測過程10.1.準備
裝有無菌水的瓶子：推開藍色帽，沿著玻璃邊緣垂直向上拉開，丟棄。
煙酸培養基：足夠進行至少6條微孔板試驗，培養基必須在試驗之前新鮮制備。打開瓶蓋用鑷子從干燥劑中取出培養基，丟掉干燥劑。－加入10ml無菌水（取自試劑盒中）至煙酸培養基中－蓋好培養基瓶，搖勻－在90～100℃水浴中加熱至少5分鐘，期間振蕩至少5次；期間保證瓶子封閉－迅速冷卻至室溫（低于30℃）－使用0.2μm無菌濾紙過濾培養基至15ml無菌離心管中每個
煙酸標準品都足夠進行至少3個孔的試驗。標準品必須在試驗之前新鮮制備。－打開維生素煙酸標準品瓶，取出蓋子。丟掉蓋子和紅色塞子－加入x ml（x＝詳見質量保證書）無菌水（取自試劑盒）至標準品瓶中。用移液管溶解標準品：用標準品瓶中的水沖洗移液管尖數次＝
標準品濃縮液－取6個無菌管（1.5～2.0ml）并按照下列表格準備標準品溶液。
| 標準曲線 mg/100g(ml) | 無菌水 μl | | 標準濃縮液 μl | | 總體積 μl |
| 空白：0 | 900 | ＋ | 0 | ＝ | 900 |
| 標準品1：0.16 | 900 | ＋ | 100 | ＝ | 1000 |
| 標準品2：0.32 | 400 | ＋ | 100 | ＝ | 500 |
| 標準品3：0.64 | 300 | ＋ | 200 | ＝ | 500 |
| 標準品4：0.96 | 200 | ＋ | 300 | ＝ | 500 |
| 標準品5：1.60 | 0 | ＋ | 500 | ＝ | 500 |
10.2.檢測過程－用移液管吸取150μl煙酸培養基至微孔中－用移液管吸取150μl標準品貨樣品至指定的微孔中（用標準品或樣品溶液沖洗移液管尖）－用粘合箔蓋住微孔條或微孔：除去粘合箔上的保護層，將其平放在微孔條上，用手或壓舌板將粘合箔平壓，使其充分封閉微孔板條。
注意：保證粘合箔和微孔的封閉性，特別注意微孔的邊緣部分－在37℃黑暗條件下（可用孵育器）孵育44～48小時10.3.測量－再次向下擠壓粘合箔，將微孔板向上放置在桌面上，在桌面平面上振蕩，使微生物溶解在培養基中－對角揭去粘合箔，從左邊開始進行－破壞微孔液體表面所有的泡沫（可以用移液管尖去除）－用ELISA reader 610～630nm（或540～550nm）條件下讀取渾濁度注意：－當孵育44～48小時后，微孔板能在冰箱里最多儲存48小時，因此必須在這個時間段內測量混濁度－為了避免由于假期或周末所產生的時間上的損失，微孔板能在60小時之后進行評估計算。推薦使用定時器在48小時之后關閉孵育器。11.計算推薦在計算結果時使用必發公司提供的配套軟件。樣品稀釋倍數40已經包括在標準曲線中（詳見質量保證書）。在下面的公式中，只需要考慮提取的進一步稀釋倍數和不同的樣品重量。液體樣品（富含維生素的果汁、健康飲品） 從標準曲線上讀取的濃度×稀釋倍數煙酸 ＝ ────────────────────（mg/100ml） 樣品總量（ml）固體樣品（谷物、嬰兒食品、面粉、面包、添加物） 從標準曲線上讀取的濃度×稀釋倍數×0.901煙酸 ＝ ────────────────────────（mg/100g） 樣品總量（g）膠囊或藥片 從標準曲線上讀取的濃度×稀釋倍數煙酸 ＝ ────────────────────（mg/100g） 樣品總量（g）從標準曲線上讀取的濃度×藥片重量（g）×稀釋倍數煙酸＝ ──────────────────────────（mg/藥片） 100×樣品總量（g）樣品提取的稀釋倍數計算示例
例a： 固體樣品，標注濃度3mg / 100g 提取液稀釋應在標準曲線中間區域。因此，濃度應除以標準2計算： 3mg ÷ 0.032mg ＝ 93.75 → 結果為稀釋倍數大約為100→ 1 ： 100 稀釋1 ： 1001 ： 10（0.1 ml ＋ 0.9 ml）， 1 ： 10（0.1 ml ＋ 0.9 ml）
例b： 藥片，標注濃度3mg / 片 計算： 3mg / 片，平均重量1g ＝ 300mg / 100g300mg ÷ 0.032 mg ＝ 9375→結果為稀釋倍數大約為10000→1 ：10000稀釋1 ：100001 ：10（0.1 ml ＋ 0.9 ml），1 ：10（0.1 ml ＋ 0.9 ml）1 ：10（0.1 ml ＋ 0.9 ml），1 ：10（0.1 ml ＋ 0.9 ml）
責權聲明：
①本版塊的所有文章及圖片均為客戶自行編輯，其版權為客戶所有，客戶需保證其編輯的文章及圖片均無侵犯任何第三方的合法權益，如被第三方維權，由客戶承擔全部責任；
② 本網站僅為展示平臺，如要轉載，請與我網站聯系協助獲得授權；
③發布內容如有侵權，請及時聯系我網站進行刪除。
※ 聯系電話：400-854-6788
