產品簡介
RIDASCREEN® β-Lactoglobulin（訂貨號：R4901）ß-乳球蛋白檢測試劑盒為競爭性酶聯免疫法檢測試劑盒，可定量檢測水解乳制品，包括低致敏性的嬰兒食品中的天然的和經過加工的ß-乳球蛋白。
若需要檢測乳清、含奶或含奶粉的飲料，及果汁、葡萄球、啤酒和食品如香腸、沙拉醬、烘焙食品、冰激凌、巧克力和酸奶等重的天然的和經過加工的ß-乳球蛋白，請選擇RIDASCREEN®FAST β-Lactoglobulin 快速ß-乳球蛋白檢測試劑盒（訂貨號：R4902）。
若需要檢測食品樣品中含有的酪蛋白或酪蛋白酸鹽，請選擇RIDASCREEN®FAST Casein 快速酪蛋白檢測試劑盒（訂貨號：R4612）。
試劑盒中含有酶聯免疫檢測所需的所有試劑，包括標準品。
試劑盒足夠進行96次檢測（包括標準測定）。
定量分析需要使用微孔板酶標儀。
樣品處理： 均質和提取
檢測時間： 樣品制備（以10個樣品為例）.................約30分鐘
檢測過程（孵育時間）........................2小時45分鐘
檢測限： 0.115 ppm ß-乳球蛋白
定量限： 5 ppm ß-乳球蛋白
回收率： 約130 %
特異性： 通過與相應物質的交叉反應確定。
ß-乳球蛋白......................................................100 %
α-, β-, κ-酪蛋白.................................................< 1 %
α-乳白蛋白.......................................................< 1 %
牛血清白蛋白...................................................< 1 %
RIDASCREEN® β-Lactoglobulin 10-07-29 3
1. 用途
RIDASCREEN® β-Lactoglobulin（訂貨號：R4901）ß-乳球蛋白檢測試劑盒為競爭性酶聯免疫法檢測試劑盒，可定量檢測水解乳制品，包括低致敏性的嬰兒食品中的天然的和經過加工的ß-乳球蛋白。
試劑盒使用天然的ß-乳球蛋白進行了校準。試劑盒可檢測天然的和經過加工的ß-乳球蛋白及其片段（在奶被加熱的過程中，天然的ß-乳球蛋白部分會發生變性。）
2. 概要
牛奶中含有3.2%的蛋白質（2.6%的酪蛋白和0.6%的乳清蛋白）。大約一半的乳清蛋白是ß-乳球蛋白組成的。
牛奶可作為原料成份之一或外源污染物而出現在食品中，從而導致過敏反應。根據2003年11月10日歐盟指令2003/89/EG，食品標簽上必須注明牛奶成分。
3. 檢測原理
檢測的基礎是抗原抗體反應。微孔板包被有ß-乳球蛋白（BLG）。加入標準品或樣品溶液和ß-乳球蛋白（BLG）抗體。游離的和固定的ß-乳球蛋白（BLG）競爭抗體結合位點（競爭性酶聯免疫分析）。在經過洗滌步驟之后，再加入過氧化物酶標記的二級抗體，用于和ß-乳球蛋白（BLG）抗體結合。沒有結合的酶標記抗體在洗滌步驟中被除去。在孔中加入底物（過氧化脲）和發色劑（四甲基對二氨基聯苯），結合的酶連接物（過氧化物酶標記的二級抗體）將無色發色劑轉化為藍色。加入反應終止液后顏色由藍色轉變為黃色。在450 nm處測量，吸光度值與樣品中的ß-乳球蛋白（BLG）濃度成反比。
4. 試劑盒組份
每一個盒中的試劑足夠進行96個試驗（包括標準測定），盒中的組份如下：
1 x 96孔微孔板（12條每條8孔） 包被有ß-乳球蛋白
6 x ß-乳球蛋白標準品，每瓶1.3 ml 0 ppb（零標準品），10 ppb，30 ppb，90 ppb，270 ppb，810 ppb ß-乳球蛋白水溶液 紅色，即用型
1 x ß-乳球蛋白抗體液（1 ml）...............................................................黑色瓶蓋 濃縮液
1 x 酶連接物（12 ml）...........................................................................紅色瓶蓋 過氧化物酶標記的二級抗體
即用型 4 RIDASCREEN® β-Lactoglobulin 10-07-29
1 x 底物（7 ml）.....................................................................................綠色瓶蓋 含過氧化脲
1 x 發色劑（7 ml）.................................................................................藍色瓶蓋 含四甲基對二氨基聯苯
1 x 反應終止液（14 ml）........................................................................黃色瓶蓋 含1 N的硫酸
1 x 緩沖液（100 ml） 樣品和抗體稀釋緩沖液，以及洗滌緩沖液，均為濃縮液
5. 另需的試劑和設備
5.1. 設備：
− 微孔板酶標儀（450 nm）
− 離心管
− 旋轉搖床
− 濾紙
− 水浴鍋（60 °C）
− 可調式20 μl - 200 μl 和200 - 1000 μl 微量移液器
5.2. 試劑：
− 蒸餾水
6. 操作者應該注意之事項
本試劑盒建議由經過了培訓的實驗人員進行操作使用。請嚴格按照說明書的步驟和要求進行檢測使用。
反應終止液含1 N硫酸（R36/38， S2-26）。
7. 儲存條件
保存試劑盒于 2 - 8 °C，不要冷凍。
將不用的微孔板放進原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封儲存于2 - 8 °C條件下。
無色發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
對過了有效期（見試劑盒外標簽有效期）的試劑盒不再提供任何質量保證。
不能交叉使用不同批號的盒中試劑。 RIDASCREEN® β-Lactoglobulin 10-07-29 5
8. 試劑變質的跡象
− 發色劑在使用前顏色變藍
− 標準品1的吸光度值小于0.8 （A450 nm < 0.6）
9. 樣品處理
− 稱取2 g奶粉樣品于離心管中
− 加入蒸餾水至50 ml，在室溫條件下（20 - 25 °C）回旋振蕩10分鐘。
− 提取液按比例1:20（1+19）用稀釋后的樣品稀釋緩沖液（參見10.1.）稀釋（例如：50 μl樣品 + 950 μl緩沖液）
− 每孔取50 μl進行檢測
10. 檢測步驟
10.1. 檢測前的準備
使用之前將所有試劑回溫至室溫（20 - 25 °C）。
緩沖液（樣品和抗體稀釋緩沖液，以及洗滌緩沖液）為10倍濃縮液。使用前取需要的緩沖液用蒸餾水稀釋，稀釋比例1:10（1+9）（例如：100 ml濃縮液稀釋為1l即用型緩沖液）。稀釋后的緩沖液在4 °C條件下可保存4周。
ß-乳球蛋白抗體液（黑色瓶蓋瓶子）為濃縮液。由于稀釋后的弱穩定性，所以只稀釋實際需用量的抗體液。在吸取濃縮液之前，要輕輕的振搖以便充分混均。用稀釋后緩沖液（參見上文）以1:11（1+10）的比例稀釋抗體液（例如：200 μl濃縮液 + 2.0 ml緩沖液，足夠4個微孔板條用）。
10.2. 檢測操作
仔細洗板非常重要。避免在操作過程中微孔出現干燥。
1. 將足夠標準品和樣品檢測所需數量的孔條插入微孔板架，均做兩個平行實驗，記錄下標準品和樣品的位置。
2. 將50 μl標準品及處理好的樣品溶液加到相應的微孔中，均做兩個平行實驗
3. 向每一個微孔中加入50 μl稀釋后的ß-乳球蛋白抗體液（參見10.1.），充分混合，在室溫條件下（20 - 25 °C）孵育2小時。
4. 倒出孔中的液體，將微孔板架倒置在吸水紙上拍打（每輪拍打3 次）以保證完全除去孔中的液體。每孔加入250 μl 稀釋后的洗滌緩沖液（參見10.1.）洗滌微孔。上述操作重復進行兩遍。 6 RIDASCREEN® β-Lactoglobulin 10-07-29
5. 然后向每一個微孔中加入100 μl酶連接物溶液，充分混合，在室溫條件下（20 - 25 °C）孵育30分鐘。
6. 倒出孔中的液體，將微孔板架倒置在吸水紙上拍打（每輪拍打3 次）以保證完全除去孔中的液體。每孔加入250 μl 稀釋后的洗滌緩沖液（參見10.1.）洗滌微孔。上述操作重復進行兩遍。
7. 向每一個微孔中加入50 μl 底物和50 μl發色劑，充分混合后在室溫（20 - 25 °C）條件下暗處孵育15分鐘。
8. 向每一個微孔中加入100 μl 反應終止液，充分混合。在加入反應終止液后10 分鐘內于450 nm 處測量吸光度值。
11. 結果評估
請使用R-Biopharm德國拜發公司專門為RIDASCREEN® 系列產品設計的應用軟件RIDA® SOFT Win（訂貨號：Z9999）來進行結果分析。
關于標準曲線請參看試劑盒中附帶的質保證書。
根據從校正曲線的吸光度值得到ß-乳球蛋白為μg/kg（ppb）。此濃度必須乘以稀釋倍數500。然后ß-乳球蛋白的濃度被換算為mg/kg（ppm）。
計算舉例：
從校正曲線上讀出檢測結果為150 ppb ß-乳球蛋白。在乘以500的稀釋倍數后，得出被測樣品中ß-乳球蛋白的含量為75000 μg/kg （75 ppm）。
備注：
若檢測結果低于試劑盒檢測限，食品樣品中還可能含有其他牛奶中的成份如酪蛋白和乳糖。
建議
為使檢測結果更為有效：
- 如果樣品的吸光度值小于0.4，須繼續稀釋并重新檢測（！進行結果分析時必須考慮后增加的稀釋倍數！）
- 對每個樣品均做兩個平行實驗
- 應使用陰性和陽性（人工添加）樣品。
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