產(chǎn)品簡(jiǎn)介
RIDASCREEN®FAST Ei / Egg Protein（訂貨號(hào)：R6402）快速全蛋檢測(cè)試劑盒，采用夾心酶聯(lián)免疫法，用于定量檢測(cè)食品中的全蛋含量。
試劑盒中含有酶聯(lián)免疫檢測(cè)所需的所有試劑，包括標(biāo)準(zhǔn)品。本試劑盒已使用針對(duì)ELISA的NIST RM8445（全蛋粉）標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)。
試劑盒足夠進(jìn)行48次檢測(cè)（包括標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定）。
定量分析需要使用微孔板酶標(biāo)儀。
樣品處理： 均質(zhì)、提取和離心
檢測(cè)時(shí)間： 樣品制備（以10個(gè)樣品為例）.................約20分鐘檢測(cè)過(guò)程（孵育時(shí)間）...................................30分鐘
檢測(cè)限： 0.27 mg/kg 全蛋粉NIST RM8445
（相當(dāng)于0.07 mg/kg 蛋清蛋白）
定量限： 0.5 mg/kg 全蛋粉
（相當(dāng)于0.13 mg/kg 蛋清蛋白）
特異性： 特異性多克隆抗體可結(jié)合蛋清蛋白。
與雞肉、火雞肉、豬肉或者生/熟的牛肉無(wú)交叉反應(yīng)。
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1. 用途
RIDASCREEN®FAST Ei / Egg Protein快速全蛋檢測(cè)試劑盒，采用夾心酶聯(lián)免疫法，用于定量檢測(cè)食品，如面條、沙拉調(diào)味汁、香腸、葡萄酒、蛋糕或面包的混合烘焙物及冰淇淋等中的蛋含量。
本試劑盒已使用針對(duì)ELISA方法的NIST RM 8445標(biāo)準(zhǔn)品（全蛋粉）進(jìn)行了校準(zhǔn)和驗(yàn)證。
2. 概要
蛋可作為原料成份之一或外源污染物出現(xiàn)在未經(jīng)加工的及經(jīng)煮過(guò)的食品產(chǎn)品中。根據(jù)2003年11月10日歐盟指令2003/89/EG，食品標(biāo)簽上必須標(biāo)明蛋會(huì)導(dǎo)致過(guò)敏。
蛋內(nèi)含有9 至11 %的蛋白質(zhì)，而80 %的蛋白質(zhì)為（四種）主要過(guò)敏蛋白質(zhì)。這四種主要過(guò)敏蛋白質(zhì)分別是卵類粘蛋白（11 %）、卵清蛋白（54 %）、卵轉(zhuǎn)鐵球蛋白（12 %）和溶解酵素（3.5 %）。蛋黃中的蛋白質(zhì)過(guò)敏性則稍弱一些。
3. 檢測(cè)原理
微孔板中包被有針對(duì)蛋清蛋白的特殊抗體。加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，其中含有的蛋清蛋白和特殊的抗體結(jié)合。沒(méi)有結(jié)合的部分在洗滌步驟中被除去。隨后加入過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗體（酶連接物）。抗體酶連接物和抗體抗原復(fù)合物結(jié)合，形成抗體-抗原-抗體復(fù)合物（“三明治”夾心法）。沒(méi)有結(jié)合的酶連接物在洗滌步驟中被除去。將底物/發(fā)色劑加入孔中。酶連接物將發(fā)色劑轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的產(chǎn)物。加入反應(yīng)終止液后使顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。在450 nm 處測(cè)量。吸光度值與樣品中的蛋濃度成正比。
4. 試劑盒組份
每一個(gè)盒中的試劑足夠進(jìn)行48個(gè)試驗(yàn)（包括標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定），盒中的組份如下：
1 x 48孔微孔板（6條每條8孔） 包被有針對(duì)蛋清蛋白的抗體
5 x 標(biāo)準(zhǔn)品*），每瓶1.3 ml 0 ppm（零標(biāo)準(zhǔn)品），0.5 ppm，1.5 ppm，4.5 ppm，13.5 ppm全蛋粉水溶液，即用型
1 x 酶連接物（0.7 ml）..........................................................................紅色瓶蓋過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗體，濃縮液
1 x 底物/發(fā)色劑（10 ml）.......................................................................棕色瓶蓋紅色 1 x 反應(yīng)終止液（14 ml）........................................................................黃色瓶蓋含1 N的硫酸
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1 x 過(guò)敏原提取緩沖液（125 ml）...........................................................綠色瓶蓋 10倍濃縮液1 x 洗滌緩沖液（100 ml）......................................................................棕色瓶蓋 10倍緩沖液
*） 已考慮了在樣品處理的過(guò)程中產(chǎn)生的稀釋倍數(shù)20。所以樣品中蛋濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出。
5. 另需的試劑和設(shè)備
5.1. 設(shè)備：
−微孔板酶標(biāo)儀（450 nm）
−離心機(jī) + 離心管
−振蕩器
−水浴鍋
−粉碎機(jī)，研缽，Ultra-Turrax勻漿機(jī)或者均質(zhì)器
−刻度移液管
−可調(diào)式20 μl - 200 μl 和200 - 1000 μl 微量移液器
5.2. 試劑：
−蒸餾水或去離子水
6. 操作者應(yīng)該注意之事項(xiàng)
建議由經(jīng)過(guò)相關(guān)培訓(xùn)的實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行本試劑盒的使用操作。請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書的要求使用本試劑盒。
洗滌緩沖液中含有硫柳汞。避免皮膚接觸。
反應(yīng)終止液含1 N硫酸（R36/38， S2-26）。
7. 儲(chǔ)存條件
保存試劑盒于 2 - 8 °C，試劑盒組份不要冷凍。
將不用的微孔板放進(jìn)原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封儲(chǔ)存于2 - 8°C條件下。
紅色底物/發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
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對(duì)過(guò)了有效期（見(jiàn)試劑盒外標(biāo)簽有效期）的試劑盒不再提供任何質(zhì)量保證。
不能交叉使用不同批號(hào)的盒中試劑。
8. 試劑變質(zhì)的跡象
−紅色底物/發(fā)色劑在使用前顏色變藍(lán)
−標(biāo)準(zhǔn)品5的吸光度值小于0.8（E450 nm < 0.8）
9. 樣品處理
操作設(shè)備如粉碎機(jī)、玻璃容器或抹刀在每次處理樣品前后完全清潔，以去除殘留的蛋，避免污染。
過(guò)敏原提取緩沖液為10倍濃縮液。在稀釋前在水浴鍋中37 °C條件下充分溶解可能出現(xiàn)的結(jié)晶并混合。然后對(duì)加熱后的濃縮液按比例1:10（1+9）用蒸餾水稀釋（例如：100 ml緩沖液濃縮液 + 900 ml蒸餾水，或者直接加入蒸餾水至1250 ml）。稀釋后的提取緩沖液在2 - 8 °C條件下可保存約12周。
− 5 g樣品小心粉碎，研磨并充分混合
−取其1 g樣品，加入20 ml提取緩沖液，在60 °C條件下提取10分鐘，提取緩沖液的溫度應(yīng)為約60 °C。
−樣品離心：至少10 min / 2500 g / 盡量保持4 °C 或者對(duì)提取液進(jìn)行過(guò)濾（也可以取2 ml提取液加入到新的試管中，10分鐘高速離心）
−取100 μl上清液每孔進(jìn)行檢測(cè)
備注：
樣品提取物在2 - 8 °C條件下可保存3天。不用的提取物在-20 °C條件下可保存數(shù)月。
10. 檢測(cè)步驟
10.1. 檢測(cè)前的準(zhǔn)備
使用之前將所有試劑回溫至室溫（20 - 25 °C）。
抗體酶連接物（紅色瓶蓋瓶子）為11倍濃縮液。由于稀釋的酶連接物的弱穩(wěn)定性，所以只稀釋實(shí)際需用量的酶連接物物。在吸取濃縮液之前，要輕輕的振搖以便充分混均。用蒸餾水以1:11（1+10）的比例稀釋酶連接物濃縮液（例如：200 μl濃縮液 + 2.0 ml蒸餾水，足夠2個(gè)微孔板條用）。
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洗滌緩沖液為10倍濃縮液，在稀釋前如果存在結(jié)晶，應(yīng)在37 °C水浴鍋中加熱使其完全溶解并充分混合。對(duì)加熱后的濃縮液按比例1:10（1+9）用蒸餾水稀釋（例如：100 ml緩沖液濃縮液 + 900 ml蒸餾水）。稀釋后的緩沖液在2 - 8 °C條件下可保存約4周。
10.2. 檢測(cè)操作
仔細(xì)洗板非常重要。避免在操作過(guò)程中微孔出現(xiàn)干燥。
每次檢測(cè)不應(yīng)使用多于3條微孔板條（24孔）。
1. 將足夠標(biāo)準(zhǔn)品和樣品檢測(cè)所需數(shù)量的孔條插入微孔板架，記錄下標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置。
2. 將100 μl標(biāo)準(zhǔn)品及處理好的樣品溶液加到相應(yīng)的微孔中，在室溫條件下（20 - 25 °C）孵育10分鐘。
3. 倒出孔中的液體，將微孔板架倒置在吸水紙上拍打（每輪拍打3 次）以保證完全除去孔中的液體。每孔加入250 μl洗滌緩沖液（參見(jiàn)10.1.）洗滌微孔。上述操作重復(fù)進(jìn)行兩遍。
4. 向每一個(gè)微孔中加入100 μl稀釋后的酶連接物溶液（參見(jiàn)10.1.），充分混合，在室溫條件下（20 - 25 °C）孵育10分鐘。
5. 倒出孔中的液體，將微孔板架倒置在吸水紙上拍打（每輪拍打3 次）以保證完全除去孔中的液體。每孔加入250 μl洗滌緩沖液（參見(jiàn)10.1.）洗滌微孔。上述操作重復(fù)進(jìn)行兩遍。
6. 向每一個(gè)微孔中加入100 μl底物/發(fā)色劑，充分混合后在室溫（20 - 25 °C）條件下暗處孵育10 分鐘。
7. 向每一個(gè)微孔中加入100 μl 反應(yīng)終止液，充分混合。在加入反應(yīng)終止液后10 分鐘內(nèi)于450 nm 處測(cè)量吸光度值。
11. 結(jié)果評(píng)估
請(qǐng)使用R-Biopharm德國(guó)拜發(fā)公司專門為RIDASCREEN® 系列產(chǎn)品設(shè)計(jì)的應(yīng)用軟件RIDA® SOFT Win（訂貨號(hào)：Z9999）來(lái)進(jìn)行結(jié)果分析。使用Cubic spline功能進(jìn)行結(jié)果評(píng)估。關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)曲線請(qǐng)參看試劑盒中附帶的質(zhì)保證書。
如果零標(biāo)準(zhǔn)品的E450 nm較高，可認(rèn)為是未充分洗滌或被污染。
如果樣品吸光度值（E450 nm）大于標(biāo)準(zhǔn)品5的吸光度值，應(yīng)繼續(xù)稀釋后再次檢測(cè)，以使稀釋后的檢測(cè)結(jié)果在標(biāo)準(zhǔn)曲線的可讀范圍之內(nèi)。
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請(qǐng)注意：
如果完全按照試劑盒說(shuō)明書中介紹的方法進(jìn)行樣品處理和檢測(cè)，那么樣品的稀釋倍數(shù)為20。全蛋粉濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出（已考慮稀釋倍數(shù)20（參見(jiàn)4*））。
如果采用大于1:20的稀釋倍數(shù)，在計(jì)算全蛋粉濃度時(shí)應(yīng)考慮實(shí)際的稀釋倍數(shù)。
本試劑盒已使用針對(duì)ELISA方法的NIST RM 8445標(biāo)準(zhǔn)品（全蛋粉）進(jìn)行了校準(zhǔn)和驗(yàn)證。試劑盒的檢測(cè)結(jié)果以mg/kg全蛋粉的形式得出。RM8445標(biāo)準(zhǔn)品的總蛋白含量為49%。若將檢測(cè)結(jié)果乘以0.49，便可得出樣品中總蛋白的mg/kg（ppm）含量。若將檢測(cè)結(jié)果乘以0.263，則可以得出樣品中蛋清蛋白的mg/kg（ppm）含量。
計(jì)算舉例：
從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出的檢測(cè)結(jié)果為10 mg/kg全蛋粉。若將這個(gè)結(jié)果乘以0.49便可得到樣品中含有的總蛋白為4.9 mg/kg（ppm），若乘以0.263便可以得到樣品中含有的蛋清蛋白含量為2.63 mg/kg（ppm）。
建議：
為了保證獲得高度可靠的檢測(cè)效果：
−每個(gè)樣品均進(jìn)行雙平行檢測(cè)
−取一個(gè)完全不含蛋的樣品和一個(gè)人工添加了蛋粉的樣品作為質(zhì)控樣品，同時(shí)檢測(cè)
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