產品簡介
RIDASCREEN®FAST Hazelnut（訂貨號：R6802）快速榛果仁檢測試劑盒，采用夾心酶聯免疫法，用于定量檢測食品，如谷物、烘焙食品、冰淇淋及巧克力等中的榛果仁及榛果仁成分。
該酶聯免疫反應產品對于黑巧克力樣品的檢測經德國BVL（按照§64 LMBG德國食品法中的方法）審核認證。RIDASCREEN® FAST Hazelnut快速榛果仁檢測試劑盒對于巧克力樣品的檢測亦經環形實驗環形實驗校準。
試劑盒中含有酶聯免疫檢測所需的所有試劑，包括標準品。
試劑盒足夠進行48次檢測（包括標準測定）。
定量分析需要使用微孔板酶標儀。
樣品處理： 均質、提取和離心
檢測時間： 樣品制備（以10個樣品為例）.....................約20分鐘檢測過程（孵育時間）......................................30分鐘
檢測限： 1.5 ppm 榛果仁，相當于樣品中0.00015 % 榛果仁含量
定量限： 2.5 mg/kg (ppm)
特異性： 交叉反應： 葵花籽 ..........................................................< 0.07% 亞麻仁（輾壓），杏仁....................................不可檢出檢測情況與樣品的烘焙程度相關。針對高度烘焙的榛果仁樣品其回收率為約80%。試劑盒中使用的榛果仁標準提取樣品中含有約9%的蛋白。
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1. 用途
RIDASCREEN®FAST Hazelnut快速榛果仁檢測試劑盒，采用夾心酶聯免疫法，用于定量檢測食品，如谷物、烘焙食品、冰淇淋及巧克力等中的榛果仁及榛果仁成分。
2. 概要
榛果仁可作為原料成份或外界污染源而出現在未經加工的及煮過的食品產品中。依照2007年11月27日歐盟指令2007/68/EG，在食品標簽上必須標明榛果仁成份為食品過敏源。
3. 檢測原理
檢測的基礎是抗原抗體反應。微孔板中包被有針對榛果仁蛋白的特殊抗體。加入標準品或樣品，其中含有的榛果仁蛋白和特殊的抗體結合形成抗體抗原復合物。沒有結合的部分在洗滌步驟中被除去。隨后加入過氧化物酶標記的抗體（酶連接物）。抗體酶連接物和抗體抗原復合物結合，形成抗體-抗原-抗體復合物（“三明治”夾心法）。沒有結合的酶連接物在洗滌步驟中被除去。將底物/發色劑加入孔中。酶連接物將發色劑轉化為藍色的產物。加入反應終止液后使顏色由藍色轉變為黃色。在450 nm 處測量。吸光度值與樣品中的榛果仁濃度成正比。
4. 試劑盒組份
每一個盒中的試劑足夠進行48個試驗（包括標準測定），盒中的組份如下：
1 x 48孔微孔板（6條每條8孔） 包被有針對榛果仁的抗體
5 x 標準品*），每瓶1.3 ml 0 ppm（零標準品），2.5 ppm，5 ppm，10 ppm，20 ppm榛果仁
水溶液，即用型 1 x 酶連接物（0.7 ml）..........................................................................紅色瓶蓋過氧化物酶標記的抗體，濃縮液
1 x 底物/發色劑（10 ml）.......................................................................棕色瓶蓋紅色 1 x 反應終止液（14 ml）........................................................................黃色瓶蓋含1 N的硫酸1 x 過敏原提取緩沖液（125 ml）...........................................................綠色瓶蓋 10倍濃縮液1 x 洗滌緩沖液（100 ml）......................................................................棕色瓶蓋 10倍緩沖液
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*） 已考慮了在樣品處理的過程中產生的稀釋倍數20。所以樣品中榛果仁濃度可直接從標準曲線中讀出。
5. 另需的試劑和設備
5.1. 設備：
−微孔板酶標儀（450 nm）
−離心機 + 離心管
−振蕩器
−水浴鍋
−粉碎機，研缽，Ultra-Turrax勻漿機或者均質器
−刻度移液管
−可調式20 μl - 200 μl 和200 - 1000 μl 微量移液器
5.2. 試劑：
−蒸餾水或去離子水
−脫脂奶粉（食品級）
6. 操作者應該注意之事項
建議由經過相關培訓的實驗人員進行本試劑盒的使用操作。請嚴格按照說明書的要求使用本試劑盒。
洗滌緩沖液中含有硫柳汞。避免皮膚接觸。
反應終止液含1 N硫酸（R36/38， S2-26）。
7. 儲存條件
保存試劑盒于 2 - 8 °C，不要冷凍。
將不用的微孔板放進原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封儲存于2 - 8°C條件下。
紅色底物/發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
對過了有效期（見試劑盒外標簽有效期）的試劑盒不再提供任何質量保證。
不能交叉使用不同批號的盒中試劑。
8. 試劑變質的跡象
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−紅色底物/發色劑在使用前顏色變藍
−標準品5的吸光度值小于0.8（E450 nm < 0.8）
9. 樣品處理
以往分析的榛果仁殘留必須去除！樣品處理應該在充分清潔或新的玻璃器皿中進行。
同樣，粉碎機等設備必須在每次樣品處理后進行清潔，去除榛果仁殘留。
過敏原提取緩沖液為10倍濃縮液。在稀釋前在水浴鍋中37 °C條件下充分溶解可能出現的結晶并混合。然后對加熱后的濃縮液按比例1:10（1+9）用蒸餾水稀釋（例如：100 ml緩沖液濃縮液 + 900 ml蒸餾水，或者直接加入蒸餾水至1250 ml）。稀釋后的提取緩沖液在2 - 8 °C條件下可保存約12周。
− 5 g樣品小心粉碎，研磨并充分混合（巧克力樣品融化并混合）
−取其1 g樣品，加入1 g脫脂奶粉（參見5.2.）
−加入20 ml提取緩沖液（提取緩沖液的溫度應為約60 °C），充分混合，在60 °C條件下提取10分鐘，偶爾振蕩。
−離心：至少10 min / 2500 g / 盡量保持4 °C （或將2 ml提取液收集于一反應容器中，在微量離心機中高速離心10分鐘）
−過濾上清液
−取100 μl過濾后的上清液每孔進行檢測
樣品提取物在2 - 8 °C條件下可保存3天。不用的提取物在-20 °C條件下可保存數月。
10. 檢測步驟
10.1. 檢測前的準備
使用之前將所有試劑回溫至室溫（20 - 25 °C）。
抗體酶連接物（紅色瓶蓋瓶子）為濃縮液。由于稀釋的酶連接物的弱穩定性，所以只稀釋實際需用量的酶連接物物。在吸取濃縮液之前，要輕輕的振搖以便充分混均。用蒸餾水以1:11（1+10）的比例稀釋酶連接物濃縮液（例如：200 μl濃縮液 + 2.0 ml蒸餾水，足夠2個微孔板條用）。
洗滌緩沖液為10倍濃縮液，在稀釋前如果存在結晶，應在37 °C水浴鍋中加熱完全溶解并混合。然后對加熱后的濃縮液按比例1:10（1+9）用蒸餾水稀釋（例如：100 ml緩沖液濃縮液 + 900 ml蒸餾水）。稀釋后的緩沖液在2 - 8 °C條件下可保存約4周。
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10.2. 檢測操作
仔細洗板非常重要。避免在操作過程中微孔出現干燥。
每次檢測不應使用多于3條微孔板條（24孔）
1. 將足夠標準品和樣品檢測所需數量的孔條插入微孔板架，均做兩個平行實驗，記錄下標準品和樣品的位置。
2. 將100 μl標準品及處理好的樣品溶液加到相應的微孔中，在室溫條件下（20 - 25 °C）孵育10分鐘。
3. 倒出孔中的液體，將微孔板架倒置在吸水紙上拍打（每輪拍打3 次）以保證完全除去孔中的液體。每孔加入250 μl洗滌緩沖液（參見10.1.）洗滌微孔。上述操作重復進行兩遍。
4. 向每一個微孔中加入100 μl稀釋后的酶連接物溶液（參見10.1.），充分混合，在室溫條件下（20 - 25 °C）孵育10分鐘。
5. 倒出孔中的液體，將微孔板架倒置在吸水紙上拍打（每輪拍打3 次）以保證完全除去孔中的液體。每孔加入250 μl洗滌緩沖液（參見10.1.）洗滌微孔。上述操作重復進行兩遍。
6. 向每一個微孔中加入100 μl紅色底物/發色劑，充分混合后在室溫（20 - 25 °C）條件下暗處孵育10 分鐘。
7. 向每一個微孔中加入100 μl 反應終止液，充分混合。在加入反應終止液后10 分鐘內于450 nm 處測量吸光度值。
11. 結果評估
請使用R-Biopharm德國拜發公司專門為RIDASCREEN® 系列產品設計的應用軟件RIDA® SOFT Win（訂貨號：Z9999）來進行結果分析。
使用Cubic spline功能進行結果評估。
關于標準曲線請參看試劑盒中附帶的質保證書。
關于標準曲線請參看試劑盒中附帶的質保證書。和標準曲線中的數據尤其是和零標準品進行比較，如果吸光度值（E450 nm）較高，可認為是未充分洗滌或被麥膠蛋白污染。
如果樣品吸光度值（E450 nm）大于標準品5，應繼續稀釋后再次檢測。樣品應該稀釋至其檢測值位于試劑盒標準曲線的中部線性范圍內為好。
請注意：
按照說明數進行操作，稀釋倍數為20。榛果仁濃度可以直接從標準曲線中讀出（參見4. *）- 稀釋倍數已經在標準品濃度值中被考慮。
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如果采用大于1:20的稀釋倍數，在計算榛果仁濃度時應考慮實際的稀釋倍數。
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