奶制品中己烯雌酚檢測的固相萃取方法
（Copure® MAX）
一、實驗目的
本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為檢測手段。該方法可簡化樣品的前處理過程，節(jié)省有機溶劑的使用，操作簡便。
二、實驗目標物
己烯雌酚(CAS:56-53-1)。
三、應用范圍
本方法適用于奶制品中己烯雌酚HPLC檢測及確證。
四、參考標準
《GB/T 22992-2008 牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、雙烯雌酚殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法》。
五、實驗材料
biocomma® Copure® MAX固相萃取柱60mg/3mL(Cat.No.COMAX360)。
六、實驗方法
1、樣品提取
取5mL牛奶樣品，置于離心管中，加入10mL乙腈，渦旋混合3min，3500r/min離心10min，取上清液于離心管中，再向樣品中加入5mL乙腈，同前操作，合并提取液，50℃下氮吹至體積小于0.1mL，加水10mL，用5 mol/L NaOH 調節(jié)pH至11.0，4℃，9000r/min離心5min，備用。
2、SPE柱凈化
(1)活化：加入2mL甲醇、2mL水活化。
(2)上樣和洗脫：將樣品上清液上柱，流速為1mL/min，依次用1 mL 氨水-水(1:19, v/v)，0.5mL甲醇以3 mL/min的流速淋洗，棄去淋洗液，用4mL甲酸-甲醇(1:19, v/v)洗脫，流速為 1 mL/min，收集洗脫液。
(3)重新溶解：洗脫液于40℃氮吹至吹干，加入1mL流動相，渦旋30s溶解。過0.22µm濾膜后，用于
HPLC測定。
3、HPLC條件設備：Waters Alliance 2695
檢測器：Waters 2487 雙波長檢測器；檢測波長：245 nm
色譜柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250mm)
流動相：A：0.1%甲酸水
B：甲醇
洗脫方式：等度洗脫,A : B=30 : 70
流速：1 mL/min
進樣體積：20µL
柱溫：室溫
七、實驗結果
1、牛奶基質加標回收結果
表1牛奶中0.2mg/kg加標回收實驗結果
2、添加水平為0.2mg/kg牛奶基質中乙烯雌酚檢測色譜圖
圖1添加水平為0.2mg/kg牛奶基質中乙烯雌酚檢測色譜圖
