牛奶中氟苯尼考檢測的固相萃取方法
（Copure® HLB）
一、實驗目的
本研究利用固相萃取作為樣品前處理方法，HPLC作為分析方法，檢測牛奶樣品中的氟苯尼考殘留水平。該方法操作簡便，可簡化樣品前處理過程，減少有機溶劑的使用。
二、實驗目標物
氟苯尼考（CAS:73231-34-2）。
三、應用范圍
本方法適用于牛奶中氟苯尼考的檢測的HPLC檢測及確證。
四、實驗材料
biocomma® Copure® HLB 固相萃取柱 60mg/3mL(Cat. No. COHLB360)。
五、實驗步驟
1、樣品提取
準確稱取牛奶2g（精確到0.001g），加入乙酸乙酯15mL，高速均質1min，加入5g無水硫酸鈉，渦旋振蕩1min，搖床振蕩10min。4000r/min轉速離心5min。將上清液轉移至梨形瓶中，于45℃旋蒸至近干，用6mL水溶解殘渣，5mL×2次正己烷除脂，棄去正己烷層，取3mL水層待凈化。
2、SPE柱凈化
(1) 活化：HLB固相萃取柱使用前依次使用5mL甲醇和5mL水活化。
(2) 上樣和洗脫：將待凈化液加入已活化好的固相萃取柱中，以2mL/min的流速過柱，棄去濾液，用5mL水淋洗固相萃取柱，棄去淋洗液，抽干5min。用5 mL 5%氨化甲醇洗脫固相萃取柱，收集洗脫液。
(3) 重新溶解：洗脫液于45℃氮吹吹干，用1mL甲醇定容，0.22μm微孔濾膜過濾，供HPLC上機測試。
3、HPLC條件設備：Waters Alliance 2695
色譜柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm, 5μm)
檢測器：Waters 2487 紫外檢測器
檢測波長：224 nm
流動相：A：水B：乙腈
洗脫方式：等度洗脫
表1流動相等度洗脫條件
流速：1 mL/min
進樣體積：20μL
六、實驗結果
1、牛奶中氟苯尼考的5mg/kg添加回收結果
表2牛奶中氟苯尼考的5mg/kg添加回收結果
2、添加水平為5mg/kg牛奶中氟苯尼考殘留物色譜圖
圖1添加水平為5mg/kg牛奶中氟苯尼考殘留物色譜圖
