牛奶中氟苯尼考檢測(cè)的固相萃取方法
（Copure® HLB）
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>
本研究利用固相萃取作為樣品前處理方法，HPLC作為分析方法，檢測(cè)牛奶樣品中的氟苯尼考?xì)埩羲健Ｔ摲椒ú僮骱?jiǎn)便，可簡(jiǎn)化樣品前處理過程，減少有機(jī)溶劑的使用。
二、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物
氟苯尼考（CAS:73231-34-2）。
三、應(yīng)用范圍
本方法適用于牛奶中氟苯尼考的檢測(cè)的HPLC檢測(cè)及確證。
四、實(shí)驗(yàn)材料
biocomma® Copure® HLB 固相萃取柱 60mg/3mL(Cat. No. COHLB360)。
五、實(shí)驗(yàn)步驟
1、樣品提取
準(zhǔn)確稱取牛奶2g（精確到0.001g），加入乙酸乙酯15mL，高速均質(zhì)1min，加入5g無水硫酸鈉，渦旋振蕩1min，搖床振蕩10min。4000r/min轉(zhuǎn)速離心5min。將上清液轉(zhuǎn)移至梨形瓶中，于45℃旋蒸至近干，用6mL水溶解殘?jiān)?mL×2次正己烷除脂，棄去正己烷層，取3mL水層待凈化。
2、SPE柱凈化
(1) 活化：HLB固相萃取柱使用前依次使用5mL甲醇和5mL水活化。
(2) 上樣和洗脫：將待凈化液加入已活化好的固相萃取柱中，以2mL/min的流速過柱，棄去濾液，用5mL水淋洗固相萃取柱，棄去淋洗液，抽干5min。用5 mL 5%氨化甲醇洗脫固相萃取柱，收集洗脫液。
(3) 重新溶解：洗脫液于45℃氮吹吹干，用1mL甲醇定容，0.22μm微孔濾膜過濾，供HPLC上機(jī)測(cè)試。
3、HPLC條件設(shè)備：Waters Alliance 2695
色譜柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm, 5μm)
檢測(cè)器：Waters 2487 紫外檢測(cè)器
檢測(cè)波長(zhǎng)：224 nm
流動(dòng)相：A：水B：乙腈
洗脫方式：等度洗脫
表1流動(dòng)相等度洗脫條件
流速：1 mL/min
進(jìn)樣體積：20μL
六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
1、牛奶中氟苯尼考的5mg/kg添加回收結(jié)果
表2牛奶中氟苯尼考的5mg/kg添加回收結(jié)果
2、添加水平為5mg/kg牛奶中氟苯尼考?xì)埩粑锷V圖
圖1添加水平為5mg/kg牛奶中氟苯尼考?xì)埩粑锷V圖
