動物源性食品中氯霉素檢測的固相萃取方法（Copure® HLB）
一、實驗?zāi)康?br />本法為以Copure ® HLB(60mg/3mL)柱開發(fā)的針對動物源食品(禽肉、畜肉和水產(chǎn)品)中氯霉素樣本前處理凈化方法，HPLC法作為檢測手段。Copure ® HLB(60mg/3mL)柱凈化效果良好，回收率滿足測試要求，重現(xiàn)性好，與知名廠商同型號柱性能相當(dāng)。
二、實驗?zāi)繕?biāo)物
氯霉素(CAS:56-75-7)
三、應(yīng)用范圍
本方法適用于動物源性食品(禽肉、畜肉和水產(chǎn)品)中殘留藥物的檢測。
四、參考標(biāo)準(zhǔn)
《農(nóng)業(yè)部1025號公告-21-2008 動物源食品中氯霉素殘留檢測氣相色譜法》。
五、實驗材料
Biocomma® Copure®HLB固相萃取柱60mg/3mL(Cat.No.COHLB360)；W品牌HLB固相萃取柱60mg/3mL。
六、實驗方法
1、樣品提取
取5±0.05 g豬肉樣品，于50 mL離心管中，加入20 mL乙酸乙酯混合2 min，4000 r/min離心15 min，取上清液于另一離心管中，再用20 mL乙酸乙酯重復(fù)提取殘渣1次，合并兩次提取液，并加入500 μL氨水，于45 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干，加入500 μL甲醇混合1 min，加入10 mL4%NaCl渦旋混勻10 s，加入10 mL正己烷搖勻20次，4000r/min離心5 min，棄去上層，再用10 mL正己烷脫脂一次，加入500 μL氨水混勻供上柱凈化用。
2、SPE柱凈化
(1)活化：依次用2 mL甲醇、2 mL水活化。
(2)上樣和洗脫：取上述備用液重力作用下過柱依次用2 mL水、1 mL甲醇/乙腈/水/氨水(15:15:65:5, v/v)淋洗上樣柱并抽干，用2 mL 5%氨化甲醇溶液洗脫柱子上的待測成分。
(3)重新溶解：收集洗脫液，于45 ℃氮氣吹干，準(zhǔn)確加入1.0 mL 甲醇/水(4:6, v/v)溶液溶解殘余物混勻，0.22 µm濾膜過濾，供高效液相色譜測定。
3、HPLC條件
設(shè)備：Waters Alliance 2690
檢測器：Waters 2487 雙波長檢測器；檢測波長：278nm
色譜柱：Welch Ultimate XB-C18 (250×4.6 mm，5µm)
流動相：A: 水 B: 甲醇
洗脫方式：等度洗脫，甲醇:水=40:60(v/v)
流速：1.0 mL/min
柱溫：30 ℃
進樣量：20µL
七、實驗結(jié)果
1、添加水平為0.5mg/kg豬肉基質(zhì)中氯霉素(CAP)的添加回收結(jié)果
表1 添加水平為0.5mg/kg豬肉基質(zhì)中氯霉素(CAP)的添加回收結(jié)果
表2 W品牌同型號柱，添加水平為0.5mg/kg豬肉基質(zhì)中氯霉素(CAP)的添加回收結(jié)果
2、添加水平為0.5mg/kg豬肉基質(zhì)中氯霉素(CAP)檢測色譜圖
圖1 添加水平為0.5mg/kg豬肉基質(zhì)中氯霉素(CAP)檢測色譜圖
