生姜中涕滅威及其代謝物檢測固相萃取方法（Copure® NH2）
一、實驗目的
本研究利用固相萃取法作為生姜樣品的前處理方法，LC-MS/MS法作為檢測手段。該方法可簡化樣品的前處理過程，節省有機溶劑的使用，操作簡便。
二、實驗目標物
三種涕滅威及其代謝物標準品：涕滅威(CAS:116-06-03)，涕滅威砜(CAS:1646-88-4)，涕滅威亞砜
(CAS:1646-87-3)。
三、應用范圍
本方法適用于生姜、大米、花生等樣品中涕滅威、涕滅威砜及涕滅威亞砜LC-MS/MS檢測及確證。
四、參考標準
《SN/T 2441-2010 進出口食品中涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜殘留量檢測方法液相色譜-質譜/質譜法》。
五、實驗材料
Biocomma®Copure® NH2 固相萃取柱 500mg/3mL(Cat.No.CONH3500)。
六、實驗方法
1、樣品提取
稱取5.0 g生姜試樣(精確至0.01 g)于50 mL離心管中，加入20 ｍL乙腈，均質2 min，振蕩提取20 min，上清液過無水硫酸鈉收集到分液漏斗中，殘渣再加入20 mL乙腈，重復上述操作一次，合并2次濾液，加入20 mL用乙腈飽和的正己烷，振蕩10 min，靜置分層，棄去正己烷層，乙腈層于40 ℃下旋轉蒸發濃縮至干，用2 mL甲醇-二氯甲烷(1:99, v/v)溶解，待凈化。
2、SPE柱凈化
(1)活化：加入5 mL甲醇-二氯甲烷(1:99, v/v)活化，棄去流出液。
(2)上樣：加入待凈化液，流速控制在1 mL/min內，收集流出液。
(3)洗脫：用5 mL甲醇-二氯甲烷(1:99, v/v)洗脫，接收流出液，并重復一次，合并步驟(2)、(3)流出液。
(4)濃縮定容：40 ℃緩慢氮氣流條件下吹至近干(約0.5 mL)后揮干，用1.0 mL乙腈-0.1%甲酸水溶液(10:90,v/v)定容至1 mL，過0.45µm微孔濾膜，上LC-MS/MS，待測定。
3、LC-MS/MS條件
色譜柱：Venusil ASB C18(2.1×150 mm，5 µm)
質譜儀：API 4000
流動相：A:乙腈溶液；B:0.05%甲酸水溶液
洗脫方式：梯度洗脫
表1 流動相梯度洗脫程序
流速：0.3 mL/min
柱溫：30 ℃
進樣量：5 µL
質譜儀：API 4000
離子源：電噴霧(ESI)
掃描模式：正離子
檢測方式：多反應監測(MRM)
表2 質譜儀離子源參數 表3 涕滅威、涕滅威砜及涕滅威亞砜的母離子和子離子參數表
七、實驗結果
1、生姜基質10 µg/kg加標回收結果
表4 生姜中10 µg/kg加標回收實驗結果
2、添加水平為10µg/kg生姜基質中涕滅威及其代謝物檢測的色譜圖
圖1 涕滅威及其代謝物總離子流圖 圖2 涕滅威(Aldicarb)(208.1/89.1)質譜圖
圖3 涕滅威砜(Aldicarb S)(223.1/86.2)質譜圖 圖4 涕滅威亞砜(Aldicarb Sulfone)(207.1/132.2)質譜圖
