魚肉中甲氧芐啶檢測的固相萃取方法
（Copure® MCX）
一、實驗目的
本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為分析方法，檢測魚肉中甲氧芐啶含量。該方法可簡化樣品的前處理過程，節省有機溶劑的使用，操作簡便。
二、實驗目標物
甲氧芐啶(CAS:738-70-5)。
三、應用范圍
本方法適用于魚肉中甲氧芐啶殘留的HPLC檢測及確證。
四、實驗材料
biocomma® Copure® MCX固相萃取柱60 mg/3 mL(Cat. No. COMCX360)。
五、實驗步驟
1、樣品提取
準確稱取魚肉5.0g于50mL離心管中，加入三氯甲烷15mL、甲醇14mL、0.1mol/L硫酸6mL，渦旋2min，
4000 r/min離心3min，取上清液加入250mL的分液漏斗中，繼續加甲醇14mL，4000r/min離心3min，取
上清液合并加入250mL的分液漏斗中；分液漏斗中加入2 mL 2 mol/L氫氧化鉀，加入30mL二氯甲烷，振搖分層，取下層液，繼續加入30mL二氯甲烷，振搖分層，取下層液合并，于40℃旋蒸至近干，加6mL 5 %乙酸水溶液溶解，待凈化。
2、SPE柱凈化
(1)活化：MCX固相萃取柱使用前用5mL甲醇、5 mL 5 %乙酸水溶液活化。
(2)上樣和洗脫：往固相萃取柱中加入待凈化液，棄去流出液，加5 mL 5 %乙酸水溶液、5mL甲醇淋洗，棄去
淋洗液，抽干小柱；加15 mL 5 %氨化甲醇洗脫，收集流出液（上樣、洗脫過程保持流速1mL/min）。
(3)重新溶解：洗脫液40℃下氮吹至近干，用1mL甲醇溶解，經0.22μm濾膜過濾，供HPLC測定。
3、HPLC條件
設備：Waters Alliance 2695
色譜柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)
檢測器：Waters 2996 DAD檢測器
檢測波長：280 nm
流動相：A：甲醇B：0.5%高氯酸水溶液
洗脫方式：等度洗脫, A : B=30 : 70
流速：1.0 mL/min
進樣體積：20μL
六、實驗結果
1、2.0mg/kg魚肉中甲氧芐啶的添加回收結果
表12.0mg/kg魚肉中甲氧芐啶的添加回收結果
2、添加水平為2.0mg/kg甲氧芐啶檢測的液相色譜圖
圖1添加水平為2.0mg/kg甲氧芐啶檢測的液相色譜圖
